大鼠脑缺血再灌注损伤后Cathepsin L与p-Akt表达的研究
发布时间：2017-08-05 11:33
本文关键词：大鼠脑缺血再灌注损伤后Cathepsin L与p-Akt表达的研究
更多相关文章： 脑缺血再灌注 Cathepsin L p-Akt Caspase 3
【摘要】：目的在脑缺血再灌注后半暗带区神经细胞凋亡中溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)与磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)通路均发挥了重要作用,但关于两者在缺血性脑卒中半暗带区之间的联系研究甚少。通过建立大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型,运用Western blotting检测大鼠脑缺血半暗带各相应时间点Cathepsin L及p-Akt蛋白表达的动态变化,同时使用Cathepsin L的特异性抑制剂Z-FY-DMK及PI3K/Akt的特异性抑制剂LY294002分别进行干预,观察蛋白的表达变化,探讨Cathepsin L与p-Akt之间的关系。方法选取周龄为10-12周的清洁级健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠85只,体重为280±20g,依据随机数字表法将大鼠随机分为假手术组(Sham组)10只;脑缺血再灌注组(IRI组)25只;Cathepsin L抑制剂Z-FY-DMK干预组(CLI组)25只;PI3K-Akt抑制剂LY294002干预组(LY组)25只,IRI组、CLI组及LY组大鼠分别按3h、6h、12h及24h四个时间点每个时间点每组5只随机分为四个亚组。采用改良longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO),CLI组、LY组分别ii于术前30min侧脑室穿刺注入z-fy-dmk(20ug/1ul*5ul)及ly294002(25μg,5μldmso),sham组及iri组于术前30分钟侧脑室注入浓度为10ml/l的dmso5ul。对大鼠运用longa’s5级标准评分法评分;ttc染色检测各组大鼠24h时间点相对脑梗死体积;westernblotting法检测半暗带区相应时间点cathepsinl、p-akt及24h组caspase3的蛋白表达变化。结果1.造模成功率是83.33%。sham组大鼠未见神经功能缺损症状;iri组、cli组、ly组大鼠均可见神经功能缺损症状;与iri组相比,cli组大鼠脑神经功能缺损评分较低,ly组大鼠脑神经功能缺损评分较高(p0.05)。2.ttc染色检测sham组大鼠脑组织未见白色梗死灶,iri组、cli组、ly组缺血侧皮质均可见苍白色梗死灶,cli组大鼠脑梗死体积较iri组减小,ly组大鼠脑梗死体积较iri组增加(p㩳0.05)。3.westernblotting检测到sham组大鼠缺血侧大脑视前区皮质可见cathepsinl蛋白少许表达,iri组cathepsinl在大鼠脑缺血再灌注后3h、6h、12h呈上升趋势,12h达到高峰,24h下降,均高于sham组(p㩳0.05);cli组各相应时间点cathepsinl蛋白的表达较iri组表达减少(p0.05);ly组cathepsinl表达在再灌注后3h、6h、12h呈上升趋势,12h到达高峰,24h下降,各相应时间点cathepsinl蛋白表达较iri组增加(p0.05)。sham组大鼠缺血侧大脑视前区皮质可见p-akt蛋白少许表达,iri组p-akt蛋白表达在大鼠脑缺血再灌注后3h达高峰,6h、12h有下降,24h再度升高;CLI组p-Akt蛋白表达在再灌注后3h、6h、12h、24h呈持续增高趋势,3h、6h较IRI组相应时间点减少,12h、24h较IRI组相应时间点增高(p0.05);LY组p-Akt蛋白表达在3h达高峰,6h、12h有下降,24h再度上升,各相应时间点较IRI组都有减少(p0.05)。4.Western blotting检测各实验组大鼠缺血侧大脑皮质视前区24h时间点caspase 3蛋白表达:Sham组几乎不表达,IRI组、CLI组、LY组明显表达,CLI组较IRI组表达少(P0.05),LY组较IRI组表达增加(P0.05)。结论1.大鼠脑缺血再灌注损伤后,大鼠脑缺血半暗带Cathepsin L与p-Akt的表达具有一定相关性。2.大鼠脑缺血再灌注损伤后,Z-FY-DMK可能通过抑制Cathepsin L减少Caspase 3表达,减轻脑损伤;LY294002可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,增加Caspase 3表达,加重脑损伤。
【关键词】：脑缺血再灌注 Cathepsin L p-Akt Caspase 3
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：
- 摘要6-9
- Abstract9-13
- 第1章 绪论13-15
- 第2章 材料与方法15-21
- 2.1 材料15-16
- 2.2 实验方法16-20
- 2.3 统计学分析20-21
- 第3章 结果21-29
- 3.1 动物模型成功率及神经功能缺损评分21-22
- 3.2 TTC染色22-23
- 3.3 Western blotting检测Cathepsin L的蛋白表达23-24
- 3.4 Western blotting检测p-Akt的蛋白表达24-25
- 3.5 Western blotting检测Caspase 3 蛋白表达25-26
- 3.6 Cathepsin L与p-Akt相关分析26-29
- 第4章 讨论29-37
- 4.1 动物模型评价29
- 4.2 溶酶体与缺血再灌注损伤29-30
- 4.3 Caspase 3 与凋亡30-31
- 4.4 Cathepsin L与缺血再灌注损伤31-33
- 4.5 p-Akt与缺血再灌注损伤33-34
- 4.6 展望34-37
- 第5章 结论37-39
- 参考文献39-45
- 附录45-47
- 综述47-55
- 参考文献53-55
- 作者攻读学位期间的科研成果55-57
- 致谢57
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张辉;肖勤;陈生弟;;溶酶体蛋白酶cathepsin L与神经退行性疾病[J];中国临床神经科学;2010年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 晋云;肝细胞癌SuperArray肿瘤转移相关基因芯片筛选及Cathepsin L表达实验研究[D];第三军医大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 张创;大鼠脑缺血再灌注损伤后Cathepsin L与p-Akt表达的研究[D];南华大学;2015年
2 杨磊;Cathepsin L新型抑制剂Clik148对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其抑制星形胶质细胞死亡的机制[D];苏州大学;2012年
，本文编号：624691
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/shenjingyixue/624691.html
最近更新
教材专著
