Notch-1信号在脑缺血大鼠脑内小胶质细胞的表达及灯盏花素干预的影响

发布时间：2017-08-06 01:24

  本文关键词：Notch-1信号在脑缺血大鼠脑内小胶质细胞的表达及灯盏花素干预的影响

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【摘要】：目的：观察Notch-1信号在脑缺血大鼠大脑皮质中的表达变化,探究Notch-1信号、激活的小胶质细胞及相应炎症介质IL-1β、TNF-α之间的关系以及灯盏花素干预的影响,探讨灯盏花素对脑缺血的保护作用,为临床脑血管疾病的防治提供实验依据。方法：应用微创开颅法复制大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,将SD大鼠随机分为假手术组、MCAO组、MCAO+灯盏花素低剂量组、MCAO+灯盏花素高剂量组。利用TTC染色测定大鼠脑缺血后梗死体积,应用神经功能缺损评分法评估大鼠脑缺血后神经功能,应用免疫组织化学单标及荧光双标染色、Real-timePCR和Western blotting技术检测大鼠脑缺血后不同时间点大脑皮质中Notch-1及炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的表达变化。结果：(1)(脑缺血后梗死体积测定结果显示：MCAO+灯盏花素低剂量组、MCAO+灯盏花素高剂量组的脑梗死体积均比MCAO组明显缩小,差异具有统计学意义(P0.05),但低剂量组和高剂量组之间无显著性差异。(P0.05)。)(2)大鼠脑缺血后神经功能缺损评分结果显示：假手术组大鼠神经功能正常；MCAO组大鼠神经功能评分在不同时间点均显著增高,与假手术组比较有统计学差异(p0.05); MCAO+灯盏花素组大鼠神经功能评分在3d、7d、10d、14d较MCAO组明显降低,有统计学意义(p0.05),但各时间点均高于假手术组(p0.05)。(3)免疫组化单标染色结果显示：假手术组大鼠大脑皮层未见明显的Notch-1阳性细胞表达；MCAO组大鼠于1d、3d及1w在缺血半暗带Notch-1阳性细胞数明显增加,光密度值明显增高,与假手术组比较有显著性差异(p0.05)。MCAO+灯盏花素组,大脑皮层Notch-1阳性细胞数减少,光密度值降低,3d及1w与MCAO组比较有显著性差异(p0.05),但各时间点均高于假手术组(p0.05)。(4) Notch-1与lectin、IL-1β与lectin、TNF-α与lectin免疫荧光双标染色结果显示：假手术组大鼠大脑皮层可见体积小、分枝多,呈静息状态的小胶质细胞,仅见极少量的Notch-1、IL-1β、TNF-α免疫阳性细胞表达；MCAO组大鼠大脑皮层可见大量胞体增大为多边形或圆形,突起减少,呈激活状态的小胶质细胞,Notch-1、IL-1β和TNF-α免疫阳性细胞明显增多,部分激活的小胶质细胞与Notch-1、IL-1β、TNF-α免疫阳性细胞有共表达；MCAO+灯盏花素治疗组,激活的小胶质细胞明显减少,Notch-1、IL-1β、TNF-α免疫阳性细胞明显减少,小胶质细胞与Notch-1、IL-1β、TNF-α共表达减少。(5) Real-time PCR检测结果显示：MCAO组12h大脑皮层Notch-1、L-1β、TNF-α mRNA表达显著增高,与假手术组比较有统计学差异,随后逐渐下降,缺血后1w与假手术组比较无显著性差异；MCAO+灯盏花素低剂量组和MCAO+灯盏花素高剂量组大鼠大脑皮层Notch-1、IL-1β、TNF-αmRNA表达量明显降低,与MCAO组比较有显著性差异,其中Notch-1、IL-1βmRNA表达量在灯盏花素低剂量组和高剂量组比较无统计学差异(p0.05), TNF-αmRNA表达量在灯盏花素低剂量组和高剂量组比较有统计学差异(p0.05)= (6) Western blotting检测结果显示：大鼠MCAO 3d组大脑皮层Notch-1、IL-1β、TNF-α蛋白表达明显增多,与假手术组比较有显著性差异(p0.05);MCAO+灯盏花素低剂量组或高剂量组Notch-1、 IL-1β、TNF-α蛋白表达与MCAO组比较均明显降低,差异有统计学意义(p0.05),但低剂量和高剂量组比较无统计学差异。结论：(1)灯盏花素能明显缩小大鼠脑缺血后的梗死体积,改善大鼠脑缺血后的神经功能。(2)大鼠脑缺血后激活的小胶质细胞表达Notch-1信号。(3)灯盏花素可能通过Notch-1信号途径抑制小胶质细胞的激活和降低炎症介质IL-1β TNF-α的表达,发挥脑缺血后的神经保护作用。
【关键词】：脑缺血 Notch-1信号 灯盏花素 小胶质细胞 炎症细胞因子
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩略词10-11
• 引言11-14
• 材料与方法14-26
• 结果26-43
• 讨论43-47
• 结论47-48
• 参考文献48-52
• 综述52-61
• 参考文献57-61
• 攻读硕士学位期间发表的文章61-63
• 致谢63

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本文编号：627812