睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠学习记忆的保护作用

发布时间：2017-08-10 13:27

  本文关键词：睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠学习记忆的保护作用

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【摘要】：脑衰老(Brain aging)是一种增龄性脑功能的慢性退行性病变,也是人体整体衰老的重要组成部分。临床主要表现为学习记忆减退、认知功能障碍和思维紊乱等。随着我国人口老龄化的加剧,脑衰老的发病率正在逐年上升,而且已有低龄化趋势,这不仅影响到中老年人的生活质量,而且还给社会和家庭带来沉重的负担。但是有关脑衰老具体的发病机制尚不完全清楚,目前全世界尚未在治疗上取得突破性的进展。因此,需要深入探寻脑衰老的发病机制和研发延缓脑衰老的有效治疗方法和药物,为临床治疗脑衰老提供有效的依据。目的：1.研究内分泌衰退对脑衰老的学习记忆障碍的影响；2.研究睾丸组织移植手术对内分泌衰退的改善作用；3.研究内分泌衰退对海马神经元和雄激素受体信号通路的影响,以及睾丸组织移植手术的保护作用。方法：将40只昆明种雄性小鼠随机分为四组：假手术组、去势组、雄激素对照组(30mg/kg)和睾丸组织块移植组。切除小鼠双侧睾丸,建立内分泌衰退小鼠模型。将睾丸组织块植入已去势小鼠背部皮下或皮下肌肉层,建立同种异体睾丸组织移植模型。造模后,雄激素组小鼠灌胃治疗三个月,其他各组给予等量生理盐水。治疗结束后,取出移植组小鼠背部移植物进行肉眼和组织学观察；称量并计算小鼠性腺器官(前列腺和精囊腺)指数；ELISA法测量各组小鼠血清睾丸酮水平；Morris水迷宫观察小鼠行为学变化；HE染色观察海马CA1区形态学改变；蛋白免疫印迹检测小鼠脑内雄激素受体和凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9)的表达；RT-PCR法检测小鼠脑内雄激素受体和凋亡相关基因的表达情况。结果：1.睾丸组织移植物生长状况和形态观察：通过肉眼观察,发现睾丸组织块与周围组织之间建立了血管连接；显微镜观察病理切片,可以发现移植物在形态结构和细胞组成上基本保持完整,在多个生精小管截面中可观察到生精细胞,其中包括圆形精子细胞和长形精子细胞,但精原细胞和精母细胞很少能看到。睾丸2.间质见血窦和少量间质细胞。3.睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠性腺器官的影响：与假手术组相比,去势组小鼠性腺器官系数明显下降(P0.01)；与去势组相比,移植组小鼠性腺器官系数显著增加(P0.01)；与雄激素组相比,移植组小鼠性腺器官系数无明显差异(P0.05)。4.睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠内分泌水平的影响：与假手术组相比,去势组小鼠血清睾丸酮含量明显下降(P0.01)；与去势组相比,移植组小鼠血清睾丸酮水平显著增加(P0.01)；与雄激素组相比,移植组小鼠血清睾丸酮含量差异无统计学意义(P0.05)。5.睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠行为学的影响：与假手术组相比,去势组小鼠的潜伏逃逸期缩短,游泳路程明显增加,穿越平台的次数也大幅度地下降(P0.01)；与去势组小鼠相比,移植组小鼠潜伏逃逸期延长,游泳路程显著降低,穿越平台的次数也显著性升高(P0.01)；与雄激素组相比,移植组小鼠潜伏逃逸期、游泳路程和穿越平台的次数均无显著差异(P0.05)。6.睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠海马神经元形态结构的影响：从脑组织切片HE染色结果来看,假手术组海马CA1区神经元有4～6层,排列紧密,整齐和均匀,细胞层次分明,结构完整,核大而圆,核仁清晰可见；去势组海马CA1区细胞排列稀疏而松散,部分区域细胞有缺失或裂缝,细胞间隙大,核固缩,只有1～2层神经元,细胞数量明显减少；雄激素组和移植组海马CA1区形态结构较去势组均有好转,神经元排列整齐有序,细胞数量明显增多。7.睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠激素受体和凋亡相关蛋白表达的影响：与假手术组相比,去势组小鼠Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著增加,AR和Bcl-2蛋白表达显著下降,差异具有统计学意义(P0.01)；与去势组相比,移植组Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达显著减少,AR和Bcl-2蛋白表达明显增加,差异极显著(P0.01)；与雄激素组相比,移植组脑内AR和凋亡相关蛋白表达均无明显差异(P0.05)。8.睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠雄激素受体和凋亡相关基因表达的影响：与假手术组相比,去势组小鼠AR和凋亡相关基因的mRNA表达明显减弱,表现为弱条带,差异具有统计学意义(P0.01)；与去势组相比,移植组AR和凋亡相关基因的mRNA表达明显增强,表现为高亮度条带,差异极显著(P0.01)。与雄激素组相比,移植组脑内AR和凋亡相关基因的mRNA表达量无明显差异(P0.05)。结论：1.切除小鼠双侧睾丸后,性腺器官指数大大下降,血清睾丸酮含量也显著减少,证明了内分泌衰退小鼠模型建立比较成功。2.移植睾丸组织块后,发现组织移植物与周围组织建立血管联系,病理形态保持正常,性腺器官重量明显加重,血清睾丸酮含量大幅度上升,证明了同种异体睾丸组织移植模型建立比较成功。3.睾丸组织移植与雄激素雄激素替代疗法效果相当,可以代替服用雄激素改善脑衰老引起的学习记忆障碍。4.睾丸组织移植可能是通过分泌内源性睾丸酮,结合脑内雄激素受体,调控神经元凋亡相关基因的表达,上调Bcl-2蛋白水平,降低Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白的表达量,抑制大脑神经元凋亡,进而改善学习记忆能力。
【关键词】：脑衰老 学习记忆 睾丸组织移植 内分泌衰退痴呆型 睾丸酮
【学位授予单位】：安徽大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741;R699.8
【目录】：

• 摘要3-6
• Abstract6-11
• 英文缩略词表11-14
• 前言14-18
• 第一部分 同种异体睾丸组织移植术建立内分泌衰退模型的方法18-33
• 1 材料18-19
• 1.1 实验动物18
• 1.2 药品与试剂18-19
• 1.3 主要仪器19
• 2 方法19-25
• 2.1 试剂的配制19
• 2.2 动物模型的制备19-20
• 2.3 给药与分组20
• 2.4 取材及样本制备20-21
• 2.5 模型验证21-25
• 2.6 统计学分析25
• 3 结果与分析25-31
• 3.1 睾丸组织移植对内分泌衰退小鼠活动状况的影响25
• 3.2 睾丸组织移植物的生长状况和形态观察25-27
• 3.3 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠性腺器官系数的影响27-28
• 3.4 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠血清睾丸酮含量的影响28
• 3.5 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠行为学的影响28-31
• 4 讨论31-33
• 第二部分 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠学习记忆损害的改善作用的研究33-53
• 1 材料33-35
• 1.1 实验动物33
• 1.2 药品与试剂33-34
• 1.3 主要仪器34-35
• 2 方法35-45
• 2.1 试剂的配制35-36
• 2.2 动物模型的制备36
• 2.3 给药与分组36
• 2.4 取材及样本制备36
• 2.5 HE染色观察海马神经元病理形态36-37
• 2.6 蛋白免疫印迹法分析雄激素受体和凋亡相关蛋白表达37-40
• 2.7 RT-PCR法检测雄激素受体和凋亡相关基因的表达40-45
• 2.8 统计学分析45
• 3 结果与分析45-51
• 3.1 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠海马神经元的影响45-46
• 3.2 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠激素受体和凋亡相关蛋白表达的影响46-47
• 3.3 睾丸组织移植对内分泌衰退痴呆型小鼠雄激素受体和凋亡相关基因表达的影响47-51
• 4 讨论51-53
• 总结53-54
• 参考文献54-59
• 攻读学位期间主要成果59-60
• 致谢60-61
• 个人简历61

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 郑璐;邱蕾;张瑶;冯天骄;于建春;张占军;;远志皂苷对快速脑老化鼠学习记忆能力的改善及对神经递质的影响[J];北京中医药大学学报;2010年03期

2 崔德华;田小生;王贺成;王维;肖卫忠;樊东升;;脑衰老与阿尔茨海默病症状出现前阶段[J];生物化学与生物物理进展;2012年08期

3 陈琛;李素霞;孟适秋;闫薇;孙洪强;陆林;;脑衰老相关认知损伤研究进展[J];中国老年学杂志;2015年02期

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本文编号：650970