SAH对大鼠海马区神经细胞自噬的影响及BQ-123的干预作用

发布时间：2017-08-11 15:10

  本文关键词：SAH对大鼠海马区神经细胞自噬的影响及BQ-123的干预作用

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【摘要】：目的1探讨大鼠蛛网膜下腔出血对海马区神经细胞自噬激活的影响。2探讨BQ-123干预对蛛网膜下腔出血后海马区自噬激活的影响及可能的机制。方法1将192只清洁健康雄性SD大鼠,随机等分为4组:假手术组(Sham组)、蛛网膜下腔出血模型组(SAH组)、蛛网膜下腔出血结合应用PI3K抑制剂组(LY294002组)、蛛网膜下腔出血结合应用内皮素受体拮抗剂组(BQ-123组),每组又分为6h、24h、72h、144h四个时间点(每个时间点各12只)。2 SAH模型的制备选取经典的二次枕大池注血法;Sham组行双侧股动脉剥离,同时枕大池注射3ml生理盐水。3 LY294002组和BQ-123组于造模前30min,行侧脑室注射LY294002或BQ-123。4应用大鼠抓力测定实验评价各时间点大鼠前肢拉力情况;应用穿梭箱实验测定大鼠主动回避反应率及被动逃避时间,评价大鼠建立条件反射过程中的学习、记忆能力;从而评价大鼠行为学改变情况。5光镜观察HE染色后海马区各时间点神经细胞形态及数量变化;应用免疫组织化学染色法测定海马区PI3K、m TOR、Beclin-1、LC3-II的表达情况;RT-PCR法检测Beclin-1 m RNA、LC3-II m RNA的变化情况。结果1抓力测定实验:与Sham组比较,SAH组在各时间点拉力测定分值显著降低,差异有统计学意义(P0.05);与SAH组比较,LY294002组各时间点拉力值进一步降低;与SAH组比较,BQ-123组各时间点拉力值有所升高,两组差异均有统计学意义(P0.05)。从蛛网膜下腔出血疾病的发展趋势来看,抓力测定数值在SAH组、LY294002组及BQ-123组均呈现时间依赖性,表现出随时间延长逐渐增高的趋势,神经功能损伤症状逐渐恢复。2穿梭箱实验:与Sham组比较,SAH组在各时间点主动回避反应率(Active avoidance reaction rate,AARR)均值显著降低,被动逃避时间(Passive avoidance latency,PAL)均值显著延长,呈现明显的行为学改变,差异有统计学意义(P0.05);与SAH组比较,BQ-123组大鼠反应较灵敏,能够有效躲避电击多次,AARR显著升高,PAL时间显著缩短(P0.05);而LY294002组大鼠较SAH组自发运动量进一步下降,对电击刺激反应迟钝,AARR进一步降低,PAL时间进一步延长(P0.05)。3 HE染色结果:与Sham组相比,SAH组各时间点大鼠海马区神经细胞数量减少,差异有统计学意义(P0.05),主要可见到神经细胞胞核边界不完整,核固缩、碎裂,或出现神经核完全消失,形成空泡状结构;LY294002组各时间点神经细胞数量较SAH组明显减少,可见较多变性坏死的神经细胞,差异有统计学意义(P0.05);BQ-123组较SAH组各时间点神经细胞数量增多,神经细胞形态较SAH组或LY294002组相对正常,差异有统计学意义(P0.05)。4 Beclin-1、LC3-Ⅱ免疫组化与RTPCR结果:免疫组化:Beclin-1、LC3-Ⅱ在Sham组中有胞浆弱表达,而在SAH组各时间点的细胞核中有强阳性表达,染色呈棕黄色。与Sham组比较,SAH组在6h、24h、72h、144h时间点Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。与SAH组比较,BQ-123组Beclin-1、LC3-Ⅱ在6h、24h、72h、144h时间点呈较高水平表达,差异有统计学意义(P0.05);而LY294002组Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达水平显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。RTPCR:与Sham组比较,SAH组在6h出现Beclin-1 m RNA、LC3-Ⅱm RNA的表达增加,在24h表达最高,72h开始降低,差异有统计学意义(P0.05)。与SAH组比较,BQ-123组Beclin-1 m RNA、LC3-Ⅱm RNA在6h、24h、72h、144h时间点呈较高水平表达,差异有统计学意义(P0.05);而LY294002组各时间点Beclin-1 m RNA、LC3-Ⅱm RNA的表达水平显著降低(P0.05)。5 PI3K免疫组化结果:PI3K在Sham组中有胞浆弱表达,而在SAH各组各时间点的细胞核中有强阳性表达,染色呈棕黄色。与Sham组比较,SAH组在6h出现PI3K的表达增加,在24h表达最高,72h开始降低(P0.05)。与SAH组比较,LY294002组在6h、24h、72h、144h时间点PI3K表达均降低(P0.05);而BQ-123组各时间点PI3K表达水平均增高(P0.05)。6 m TOR免疫组化结果:m TOR在Sham组可见胞浆有强阳性表达,阳性细胞可见被染成棕黄色。而在SAH各组各时间点的可见一定量阳性细胞。与Sham组比较,SAH组各时间点m TOR阳性细胞减少(P0.05);与SAH组比较,LY294002组在各时间点m TOR表达增多(P0.05);与SAH组比较,BQ-123组中各时间点m TOR阳性细胞减少,差异均有统计学意义(P0.05)。结论1大鼠蛛网膜下腔出血后海马区自噬激活可以加速神经功能恢复,减轻海马区神经细胞损伤,可能与PI3K/Akt/m TOR信号通路有关。2 BQ-123可调节PI3K/Akt/m TOR信号激活,增强自噬激活的程度,对蛛网膜下腔出血后海马区神经细胞有保护作用。
【关键词】：蛛网膜下腔出血 自噬 神经细胞 LY294002 BQ-123
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.35
【目录】：

• 摘要4-6
• abstract6-11
• 引言11-13
• 第1章 实验研究13-40
• 1.1 材料与方法13-20
• 1.1.1 主要仪器与器材13
• 1.1.2 主要药品和试剂13-14
• 1.1.3 实验动物及分组14
• 1.1.4 动物模型制备及给药14-16
• 1.1.5 实验检测指标方法16-20
• 1.1.6 统计学分析20
• 1.2 结果20-27
• 1.2.1 各组大鼠抓力实验结果20-21
• 1.2.2 各组大鼠学习能力改变的实验结果21-22
• 1.2.3 各组大鼠海马区HE染色结果22-23
• 1.2.4 各组大鼠海马区免疫组化结果23-25
• 1.2.5 实时荧光定量PCR各组Beclin-1、LC3-Ⅱ基因表达情况25-27
• 1.3 讨论27-35
• 1.3.1 自噬在蛛网膜下腔出血中的作用28-33
• 1.3.2 BQ-123对蛛网膜下腔出血后自噬激活的影响33-35
• 1.4 小结35-36
• 参考文献36-40
• 第2章 综述 自噬在蛛网膜下腔出血中作用的研究进展40-47
• 2.1 自噬的激活40-42
• 2.1.1 自噬的发生40-41
• 2.1.2 自噬与凋亡41-42
• 2.2 自噬在蛛网膜下腔出血中的作用42-44
• 2.2.1 自噬在神经系统疾病中的作用42-43
• 2.2.2 自噬在蛛网膜下腔出血中的作用43-44
• 2.3 展望44
• 参考文献44-47
• 结论47-48
• 附录48-53
• 致谢53-54
• 导师简介54-55
• 作者简介55-56
• 学位论文数据集56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：656770