神经元特异性烯醇化酶在神经元氧糖剥夺损伤后的表达变化

发布时间：2017-08-16 09:01

  本文关键词：神经元特异性烯醇化酶在神经元氧糖剥夺损伤后的表达变化

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【摘要】：目的:探讨神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)在体外培养神经元建立氧糖剥夺模型中的水平变化。方法:通过体外原代培养24h内的新生SD大鼠大脑海马神经元,应用免疫荧光染色及电子显微镜鉴定神经元细胞,应用体外氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)建立大鼠神经元细胞缺血缺氧损伤模型,分别对复氧1h、6h、12h、24h、48h、72h的神经元提取蛋白质,并通过Western-Blot法检测上述不同时间点神经元损伤模型中NSE水平。结果:1.4-6h神经元细胞基本贴壁,随着时间增加,神经元形态发生变化,突起增长、变粗,胞体增大、饱满,突起纵横交错,形成神经网络。2.通过免疫荧光染色证明所培养的是神经元细胞,细胞核染色清晰,形态典型,突起走形如网状。3.NSE水平在神经元细胞损伤后6h开始升高,24-48h达到高峰,72h表达逐渐减少(P0.01)。结论:1.通过本方法原代培养新生大鼠海马神经元细胞,获得的神经元细胞纯度高,方法简单易行,可作为神经元体外培养的良好模型用于以后的研究。2.氧-糖剥夺可造成神经元的损伤,不同时间点细胞中神经元特异性烯醇化酶(NSE)呈现一定的时相性变化。
【关键词】：细胞原代培养 海马区神经元 氧糖剥夺 神经元特异性烯醇化酶
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.35
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文缩略词简表8-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 材料与方法12-19
• 1.材料12-15
• 1.1 实验动物12
• 1.2 主要仪器与试剂12-13
• 1.3 主要溶液的配置13-15
• 2.试验方法15-18
• 2.1 多聚赖氨酸（p LL）包被培养瓶15
• 2.2 盖玻片准备15
• 2.3 新生SD大鼠海马神经元的分离和培养15-16
• 2.4 免疫荧光染色鉴定神经元细胞16
• 2.5 神经元细胞损伤模型的建立16
• 2.6 Western-Blot法检测NSE蛋白表达水平16-18
• 3.统计学处理18-19
• 第三章 结果19-22
• 1.神经元细胞形态学观察19-20
• 2.免疫荧光染色鉴定结果20
• 3.Western-Blot法检测NSE蛋白表达水平20-22
• 第四章 讨论22-26
• 1.神经元细胞的原代培养22-23
• 2.氧-糖剥夺致海马神经元损伤对NSE表达的影响23-26
• 第五章 结论26-27
• 参考文献27-30
• 文献综述30-37
• 参考文献35-37
• 致谢37-38
• 作者简介38-39
• 导师评阅表39

【参考文献】

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本文编号：682378