不同给药途径注射CompoundC对缺血性脑损伤及自噬的影响

发布时间：2017-08-22 19:11

  本文关键词：不同给药途径注射CompoundC对缺血性脑损伤及自噬的影响

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【摘要】：目的:观察AMPK抑制剂Compound C对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤后大脑缺血半球皮层内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)表达对自噬相关蛋白LC3和Beclin-1表达的影响,探讨不同给药途径干预AMPK对大鼠缺血性脑损伤的保护作用。方法:选取若干健康成年雄性SD大鼠,将它们分为假手术组、MCAO对照组(腹腔和颅内)、腹腔注射药物干预组和颅内注射药物干预组。MCAO对照组和药物干预组采用线栓法制作永久性大脑中动脉闭塞(permanent middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,腹腔药物干预组大鼠于缺血造模结束时(完成MCAO后)立即经腹腔注射AMPK抑制剂Compound C,颅内干预组大鼠也于同样的时间段进行颅内注射同一药物,MCAO对照组和假手术对照组于同一个时间给予注射等剂量溶媒(生理盐水+DMSO)。各组大鼠于术后24h时间点取患侧皮层脑组织,使用Western blot法检测m TOR、LC3、Beclin-1的表达情况。以行为学症状评分、脑梗死体积结果来评价抑制AMPK活性对大鼠缺血性脑损伤的影响。结果:神经症状学评分结果显示:假手术组大鼠未表现出神经症状,行为学评分为0分;MCAO组大鼠出现较明显的神经症状,行为学评分高,与假手术对照组相比,具有统计学意义(p0.01);腹腔及颅内注药组与MCAO对照组相比,评分明显降低(p0.01)。腹腔给药及颅内注药对照组相比,腹腔组的评分要略低于颅内注药组(p0.01)。TTC染色法结果显示:与假手术组相比,MCAO组大鼠脑梗死体积明显加重(p0.01),而无论是腹腔给药组还是颅内给药组,与MCAO组大鼠相比较均能显著减少脑梗死体积(p0.01)。Western Blot实验结果显示:Beclin-1蛋白表达水平,MCAO组相比假手术组明显升高,(p0.01),腹腔组及颅内组的表达结果相比MCAO组则表现出减少(p0.01),将两组之间互相比较可以发现后者的蛋白表达情况下降程度更多(p0.01);LC蛋白表达趋势与Beclin-1相似,MCAO组相比假手术组明显升高,(p0.01),而与腹腔组及颅内组的表达相比时发现MCAO组的表达有减少(p0.01),两组互相比较发现颅内组的表达量下降程度更多(p0.01)。m TOR蛋白水平表达与Beclin-1相反,MCAO组的表达程度最低(p0.01),两组注药组之间相比较则显示颅内组表达量相对更高(p0.01)。结论:(1)大鼠脑缺血后可通过抑制AMPK活性抑制自噬,保护梗塞缺血后的脑部组织。(2)颅内给药相比腹腔给药可以更加明显调控自噬从而保护脑部神经元的效果。(3)颅内注射过程中对脑组织的损伤会加重脑缺血损伤。
【关键词】：脑缺血 AMPK mTOR 颅内注射 自噬
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略表10-11
• 第1章 引言11-13
• 第2章 材料与方法13-21
• 2.1 实验材料13-14
• 2.1.1 实验动物13
• 2.1.2 主要试剂13-14
• 2.1.3 主要仪器14
• 2.2 实验分组14-16
• 2.3 实验方法16-21
• 2.3.1 线栓法制作大鼠MCAO模型17
• 2.3.2 神经症状学评分方法17
• 2.3.3 颅内注射方法17
• 2.3.4 使用夹心TTC染色法比较大鼠脑梗塞体积差别[15]17-18
• 2.3.5 使用Westen blot法检测MCAO大鼠大脑缺血半球皮层AMPK-mTOR信号分子相关蛋白LC3和Beclin-1 的激活情况18-19
• 2.3.6 统计学分析19-21
• 第3章 结果与分析21-26
• 3.1 抑制AMPK活性后对各组实验大鼠的Zea longa评分影响与比较21-22
• 3.2 抑制AMPK活性对大鼠脑梗死体积的影响22-24
• 3.3 MCAO大鼠大脑缺血半球皮层mTOR信号通路蛋白水平的比较24-26
• 第4章 讨论26-32
• 4.1 实验方法26-27
• 4.2 实验的数据27-28
• 4.3 通过调节AMPK-mTOR-自噬脑组织的保护作用28-29
• 4.4 比较不同给药途径对脑保护作用的区别29-30
• 4.5 总结30-32
• 第5章 结论32-33
• 5.1 结论32
• 5.2 展望32-33
• 致谢33-34
• 参考文献34-37
• 综述 微透析技术在缺血性脑损伤中的应用37-43
• 参考文献42-43

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本文编号：720883