脑红蛋白对小鼠神经母细胞瘤细胞系生长速度的影响

发布时间：2017-08-23 07:44

  本文关键词：脑红蛋白对小鼠神经母细胞瘤细胞系生长速度的影响

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【摘要】：背景与目的脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)过去被认为在神经元细胞的特异性表达,然而现在在多种肿瘤细胞中也被发现存在表达。这说明Ngb除了参与低氧调节和保护神经元及脑组织免于缺血缺氧性损伤外,可能在肿瘤的发生、形成和代谢中也发挥了作用。迄今为止,揭露Ngb和肿瘤发生之间直接联系的文章很少。然而,另两个球蛋白家族的成员,肌红蛋白(myoglobin,Mb)和细胞红蛋白(cytoglobin,Cygb)已被多次报道参与了肿瘤的形成。其可能机制包括清除氧氮自由基,通过调节低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)表达,参与低氧环境下的适应,以及增加线粒体膜的稳定性。这些过程说明球蛋白家族或多或少通过和细胞色素c之间的某种联系,参与干扰细胞凋亡途径。之前有研究通过人类免疫缺陷病毒1型反式激活因子(transactivator of transcription,TAT)蛋白转导技术,使大分子Ngb蛋白成功穿过血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)进入脑内,解决了Ngb进入脑内细胞发挥脑保护作用的瓶颈问题,使临床应用成为可能。因此,实现临床应用之前,去探索Ngb对脑肿瘤发生、发展的潜在影响具有重要意义。本研究拟通过探讨Ngb是否在脑肿瘤细胞系中存在表达,并结合慢病毒载体介导,上调小鼠神经母细胞瘤细胞系N2a内Ngb的表达,来研究Ngb过表达状态下细胞的生长和增殖情况,为将来深入其机制的研究奠定基础,为Ngb在脑血管病的神经保护治疗中的应用提供保障。方法1.通过逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)、细胞免疫荧光、Western Blot的方法,检查Ngb在小鼠神经母细胞瘤细胞系(N2a)、人类星形胶质细胞瘤细胞系(U251)、大鼠神经胶质瘤细胞系(C6)中的表达情况。2.将包装好的Ngb过表达慢病毒导入N2a细胞,上调其表达。表达产物通过Western Blot鉴定,并进行进一步实验去观察处理组和对照组之间细胞的增殖情况,包括细胞活力检测和克隆形成试验。结果1.通过RT-PCR、免疫荧光检查和Western Blot,表明Ngb在神经母细胞瘤细胞系(N2a)与脑胶质瘤细胞系(U251、C6)均有表达。2.感染Lenti-Ngb-GFP组的Ngb表达较对照组和Lenti-GFP组显著升高。3.Lenti-Ngb-GFP感染组从第六天起细胞增值速度明显快于其他组(P0.01)。在相同环境培养14天后,慢病毒感染组和对照组在克隆数量上未见差异。然而Lenti-Ngb-GFP组形成的细胞克隆平均大于Lenti-GFP组和对照组(P0.05)。结论1.通过RT-PCR、细胞免疫荧光的方法证实Ngb在多种脑肿瘤细胞系中存在表达。2.通过使用Lenti-Ngb-GFP感染N2a细胞,成功上调了N2a细胞内Ngb的表达。3.通过细胞增殖试验和平板克隆形成试验,证实Ngb表达上调可以加速肿瘤细胞的生长。
【关键词】：脑红蛋白 脑肿瘤 细胞增殖
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 英文缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-25
• 1. 主要实验材料、试剂及仪器12-15
• 1.1 实验材料与试剂12-13
• 1.2 主要仪器设备13-14
• 1.3 常用试剂配制14-15
• 2. 实验方法15-24
• 3. 统计方法及数据库24
• 4. 数据库24-25
• 结果25-31
• 1. Ngb在多种肿瘤细胞系中的表达情况25-26
• 2. 慢病毒感染N2a情况26-28
• 3. Ngb表达对N2a细胞生长的影响28-31
• 讨论31-33
• 结论33-34
• 参考文献34-39
• 综述39-47
• 参考文献44-47
• 致谢47

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本文编号：723838