视神经脊髓炎及多发性硬化关联基因FcRL3的表达研究

发布时间：2017-08-23 14:18

  本文关键词：视神经脊髓炎及多发性硬化关联基因FcRL3的表达研究

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【摘要】：目的与疾病关联的基因多态性可能增加了疾病发生发展的危险因素,但是更重要的是认识这种多态性位点如何改变基因及细胞的功能,从而进一步认识疾病的发病机制。在本课题组的前期研究中,我们发现Fc RL3基因多态性与中国汉族人群NMO和MS相关联。在这部分,我们将进一步探讨Fc RL3基因多态性与NMO及MS患者发病的关系,特别是Fc RL3基因表达与临床用药及患者病程不同时期之间的关系;同时构建表达有Fc RL3的体外模型Jurkat细胞,观察NMO和MS的急性期治疗药物甲强龙对Fc RL3表达水平的影响。初步探讨Fc RL3基因在NMO和MS发病过程中的可能机制。方法1、收集临床确诊的MS组56例,NMO组57例以及正常对照77例。其中MS组中收集患者血液标本62份,包括部分患者不同用药时期的外周血:急性期13例,缓解期5例;NMO组收集患者血液标本98份,其中部分患者采集不同用药时期的外周血:用药前(急性期)、用药中(急性期)、用药后(缓解期),包括急性期67例,缓解期31例;正常对照的血液标本77份。采用逆转录聚合酶链反应和实时荧光定量PCR技术检测患者及正常对照标本外周血Fc RL3 m RNA的表达。2、收集Jurkat细胞株,验证Jurkat细胞株高表达Fc RL3蛋白。采用逆转录聚合酶链反应检测Jurkat细胞株不同用药时期Fc RL3 m RNA的表达;采用Western-blotting蛋白免疫印迹法检测不同用药时期Jurkat细胞株上Fc RL3蛋白的表达情况;流式细胞术分析检测激素对Jurkat细胞上Fc RL3表达的影响。结果1、Fc RL3 m RNA在患者中的表达量明显低于正常对照Fc RL3的表达量(p0.05);不管是在MS患者还是NMO患者。在NMO组中,患者急性期的表达量明显低于在缓解期的表达量(p0.05)。2、在MS组中,不同基因型表达存在显著的统计学差异,CC基因型Fc RL3 m RNA较其他基因型明显增高(CC vs CT,P=0.014;CC vs TT,p=0.005),在NMO组中,不同基因型Fc RL3 m RNA表达存在着明显差异(CT vs TT,p=0.038);然而,在正常对照中,不同基因型的Fc RL3 m RNA表达不存在统计学差异。对于相同基因型TT,NMO组的Fc RL3 m RNA表达明显低于对照组(p=0.000),同时,MS组的Fc RL3 m RNA表达明显低于对照组(p=0.001);对于相同基因型CT,NMO组(p=0.004)和MS组(p=0.009)的Fc RL3 m RNA表达明显低于对照组;对于相同基因型CC,NMO组和MS组的Fc RL3 m RNA表达与对照组相比没有明显统计学差异。3、在NMO组中,可观察到同一病人在激素不同用药时期(用药前—用药中—用药后)出现外周血Fc RL3 m RNA表达不同趋势,表现为使用激素后Fc RL3表达抑制,缓解期Fc RL3 m RNA表达升高的趋势。4、NMO患者病程的不同时期(急性期—缓解期),不同病程Fc RL3 m RNA表达存在明显的统计学差异,缓解期较急性期Fc RL3基因表达明显增高(p=0.045);在MS组中,患者临床病程的不同时期(急性期-缓解期),Fc RL3m RNA表达不存在统计学差异(p=0.297)。5、经验证Jurkat细胞上Fc RL3蛋白高表达。Jurkat细胞上Fc RL3蛋白的表达在不同浓度激素干预时有量的差异,在0.25mg甲强龙干预水平,Jurkat细胞出现抑制但不致死,故0.25mg为最适用药浓度。7、Jurkat细胞在0.25mg激素干预的不同用药时期(24h-48h),出现使用激素后Fc RL3表达抑制,用药后一定时间Fc RL3 m RNA表达升高的趋势。结论1、FcRL3基因与中国汉族人群NMO和MS均具有相关性。2、在中国汉族人群NMO和MS患者中,Fc RL3基因rs7528684位点作为启动子及其近侧区域可结合控制转录起始的元件,影响外周血Fc RL3转录,从而调节Fc RL3基因的表达。3、外周血单个核细胞的Fc RL3 m RNA在NMO和MS缓解期表达增高,推测其可能是一种保护性反应,具体机制有待进一步探讨。4、药物干预后,Jurkat细胞上Fc RL3表达呈剂量时间效应关系,推测Fc RL3基因在免疫调节中的准确作用和在胞内信号通路中起着一定的作用。目的视神经脊髓炎(Neuromyelitis Optica,NMO)和多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)为中枢神经系统慢性炎症性脱髓鞘性的自身免疫性疾病。视神经脊髓炎,以往被视为多发性硬化的一种特殊亚型。自从NMO的自身特异性抗体NMO-Ig G的发现,人们才把NMO从MS中独立出来。近来,自噬相关基因5(autophagy-related gene,ATG5)发现与许多的自身免疫性疾病和炎性疾病发病相关。ATG5在T细胞上表达的增加可能参与了MS病人的炎性脱髓鞘过程。然而目前国内外尚未见有关ATG5基因多态性与NMO及MS发病相关性的报道。本研究主要对自噬相关基因5(ATG5)基因多态性和视神经脊髓炎以及多发性硬化的疾病易感性进行探讨。方法收集2007-2012年复旦大学华山医院和福建医科大学附属第一医院神经内科住院及门诊确诊的视神经脊髓炎患者109例,多发性硬化患者144例,健康对照288例,采用Mass Array对病例组及健康对照组进行ATG5基因的5个SNP位点进行基因多态性分析。结果1、NMO组rs548234的CC基因型与正常对照组相比具有明显意义(P=0.016),同时进一步比较NMO-Ig G阳性的NMO组与正常对照组,我们发现rs548234位点T等位基因(P=0.003)和rs6937876位点的A等位基因(P=0.003)是一种保护因素。MS组ATG5的5个SNP位点的基因型和等位基因频率与正常对照组相比较不存在明显统计学差异(P0.05);2、NMO组中,rs548234的CC基因型增加疾病易感性(p=0.016);3、在NMO-Ig G(+)的NMO患者中,rs548234(p=0.003)位点的T等位基因和rs6937876(p=0.009)位点的A等位基因为其保护因素;4、我们并没有发现ATG5基因多态性与MS的发病存在相关性。结论ATG5的基因多态性与中国汉族人群视神经脊髓炎发病相关,而与多发性硬化的发生风险无明显相关性。这对进一步阐明自噬相关的自身免疫反应在NMO发病过程中的可能机制提供线索。
【关键词】：视神经脊髓炎 多发性硬化 Fc受体样基因3 Jurkat细胞 激素 视神经脊髓炎 多发性硬化 单核苷酸多态性 自噬相关基因5 相关性研究
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R744.5
【目录】：

• 第一部分 视神经脊髓炎及多发性硬化关联基因Fc RL3的表达研究中文摘要4-47
• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 英文缩写词释义表11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-26
• 结果26-39
• 讨论39-42
• 结论42-43
• 参考文献43-47
• 第二部分ATG5基因多态性与中国南方汉族人群视神经脊髓炎相关性的研究中文摘要47-77
• 摘要48-50
• Abstract50-52
• 英文缩写词释义表52-53
• 前言53-55
• 材料与方法55-64
• 结果64-67
• 讨论67-68
• 结论68-69
• 附表69-71
• 参考文献71-77
• 综述77-91
• 参考文献85-91
• 攻读硕士学位期间发表的文章91-92
• 致谢92

【参考文献】

中国博士学位论文全文数据库 前2条

1 吴骅;FCRL3基因多态性与中国人群类风湿性关节炎的关联研究及其与自身免疫性疾病相关性研究的Meta分析[D];复旦大学;2009年

2 刘启兵;中国汉族人群多发性硬化关联基因的筛选及FCRL3基因多态与多发性硬化相关性的研究[D];福建医科大学;2013年

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本文编号：725509