丁苯酞后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠XIAP、BNIP3表达的影响

发布时间：2017-08-24 12:35

  本文关键词：丁苯酞后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠XIAP、BNIP3表达的影响

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【摘要】：目的通过观察不同剂量丁苯酞(dl-3N-Butylphthalide,NBP)后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶周围皮质区、缺血侧海马CA1区XIAP、BNIP3表达的影响,探讨NBP脑保护作用机制以及XIAP、BNIP3表达与NBP是否存在剂量依赖关系。方法选用清洁级雄性SD大鼠160只,随机分为假手术组(n=16)、缺血再灌注组(n=36)、NBP低剂量(2mg/kg)组(n=36)、NBP中剂量(4mg/kg)组(n=36)和NBP高剂量(6mg/kg)组(n=36),缺血再灌注组与NBP各剂量组又分为缺血2h再灌注6h、12h、24h、48h、72h共5个观察时间点。用线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型,NBP各剂量组采用腹腔注射的方式在缺血2小时后立即给药。各组于再灌注24h时间点分别取5只大鼠行TTC染色,缺血再灌注组与NBP各剂量组于每个观察时间点均取5只大鼠用于HE染色、TUNEL染色及免疫组化染色。比较各组大鼠的神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元结构变化及XIAP、BNIP3阳性细胞表达。按照免疫组化结果,比较缺血再灌注组与NBP各剂量组XIAP、BNIP3阳性细胞表达峰值时间点的XIAPm RNA、BNIP3m RNA表达量。结果1神经功能缺损评分结果假手术组大鼠均活动自如。随再灌注时间延长,缺血再灌注组与NBP各剂量组神经功能缺损评分呈先升后降趋势,但NBP各剂量组神经功能缺损评分于再灌注各时间点均小于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P0.05);NBP低、中、高剂量组间比较,评分依次减小,差异有统计学意义(P0.05)。2 TTC染色结果假手术组脑组织未见缺血灶?缺血再灌注组与NBP各剂量组比较,缺血再灌注组梗死灶最为明显;NBP低、中、高剂量组间比较,梗死灶体积依次减小,差异有统计学意义(P0.05)。3 HE染色结果假手术组未见病理组织学改变。缺血再灌注组缺血灶周围皮质区、缺血侧海马CA1区细胞结构紊乱模糊,形态异常,核固缩,胞浆嗜酸性,随再灌注时间延长逐渐呈现为空泡状,核碎裂,细胞间质明显疏松。NBP各剂量组随时间变化呈现出与缺血再灌注组相似的变化趋势,但相同时间点,NBP各剂量组比缺血再灌注组神经元结构破坏减轻,以NBP高剂量组神经元结构损害最轻微。4 TUNEL染色结果假手术组偶见凋亡阳性神经元表达。缺血再灌注组、NBP各剂量组的凋亡阳性细胞数与假手术组比较明显增多,差异有统计学意义(P0.05)。缺血再灌注组凋亡阳性细胞表达呈现出先升后降趋势,于再灌注24h数量最多;NBP各剂量组有类似的表达趋势。相同时间点,NBP各剂量组较缺血再灌注组凋亡细胞数减少,NBP各剂量组间比较,以NBP高剂量组凋亡阳性细胞数最少,差异有统计学意义(P0.05)。5免疫组化结果假手术组可见XIAP、BNIP3阳性细胞散在性表达。缺血再灌注组、NBP各剂量组各时间点XIAP、BNIP3阳性细胞高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05)。随再灌注时间延长,缺血再灌注组XIAP阳性细胞先增多而后减少,于再灌注12h表达量最多;NBP各剂量组变化趋势与之类似。相同时间点,NBP各剂量组较缺血再灌注组XIAP阳性细胞数多,以NBP高剂量组阳性细胞数最多,差异有统计学意义(P0.05)。随再灌注时间延长,缺血再灌注组BNIP3阳性细胞数呈现出先升后降趋势,于再灌注24h表达量最高;NBP各剂量组与之有相同的变化趋势。相同时间点,NBP各剂量组较缺血再灌注组BNIP3阳性细胞数减少,且以NBP高剂量组BNIP3阳性细胞数最少,差异有统计学意义(P0.05)。6 PCR结果XIAP阳性细胞表达峰值时间点为再灌注12h,在此时间点不同组XIAPm RNA的表达结果比较:缺血再灌注组、NBP各剂量组与假手术组比较,在缺血灶周围皮质区、缺血侧海马区XIAPm RNA表达量均增多(P0.05);NBP各剂量组与缺血再灌注组比较,XIAPm RNA表达量增加(P0.05);随NBP剂量增加,XIAPm RNA表达有增高的趋势,NBP各剂量组之间比较,差异有统计学意义(P0.05)。BNIP3阳性细胞表达峰值时间点为再灌注24h,在此时间点不同组BNIP3m RNA表达结果比较:缺血再灌注组、NBP各剂量组与假手术组比较,在缺血灶周围皮质区、缺血侧海马区BNIP3 m RNA表达量均增多(P0.05);NBP各剂量组与缺血再灌注组比较,BNIP3m RNA表达量减少(P0.05);随NBP剂量增加,BNIP3m RNA表达有减少的趋势,NBP各剂量组间比较,差异仍有统计学意义(P0.05)。结论1 NBP后处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠具有保护作用,表现在大鼠神经功能缺损评分减小、脑组织梗死体积减小、病理组织损伤减轻和凋亡细胞减少。2NBP在一定剂量范围内可通过上调局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血灶周围皮质区、缺血侧海马CA1区的XIAP阳性细胞及XIAPm RNA表达、下调BNIP3阳性细胞及BNIP3m RNA表达调控细胞凋亡而发挥脑保护作用。
【关键词】：丁苯酞 后处理 缺血再灌注损伤 XIAP BNIP3
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 引言11-12
• 第1章 实验研究12-37
• 1.1 材料与方法12-18
• 1.1.1 仪器与设备12-13
• 1.1.2 动物分组与模型13-14
• 1.1.3 模型入选标准14
• 1.1.4 脑标本采集14-15
• 1.1.5 HE染色15
• 1.1.6 TTC染色15-16
• 1.1.7 TUNEL染色法16
• 1.1.8 免疫组织化学染色16-17
• 1.1.9 实时荧光定量PCR17-18
• 1.1.10 统计学处理18
• 1.2 结果18-26
• 1.2.1 神经功能缺损评分结果19
• 1.2.2 脑组织形态学变化结果19-20
• 1.2.3 神经元凋亡结果20-22
• 1.2.4 XIAP、BNIP3阳性细胞表达结果22-25
• 1.2.5 XIAP、BNIP3mRNA表达结果25-26
• 1.3 讨论26-33
• 1.3.1 脑缺血再灌注损伤与凋亡26-28
• 1.3.2 后处理概念的提出及NBP的脑保护作用28-30
• 1.3.3 NBP对CIRI大鼠XIAP表达的影响30-31
• 1.3.4 NBP对CIRI大鼠BNIP3表达的影响31-33
• 1.4 小结33
• 参考文献33-37
• 第2章 综述37-44
• 2.1 XIAP的基本概况37-39
• 2.1.1 XIAP的生物学特性37-38
• 2.1.2 XIAP与神经元缺血再灌注损伤38-39
• 2.2 BNIP3的基本概况39-42
• 2.2.1 BNIP3的生物学特性39-40
• 2.2.2 BNIP3与神经元缺血再灌注损伤40-42
• 参考文献42-44
• 结论44-45
• 附图45-56
• 致谢56-57
• 导师简介57-58
• 作者简介58-59
• 学位论文数据集59

【参考文献】

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本文编号：731344