探讨炎症因子对体外培养三叉神经节的影响

发布时间：2017-08-29 00:24

  本文关键词：探讨炎症因子对体外培养三叉神经节的影响

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【摘要】：目的体外培养完整三叉神经节组织,建立一种能够易于控制的类似三叉神经节内环境过程的生物活性体系。探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对其体外培养三叉神经节的三叉神经细胞降钙素基因相关肽(CGRP)的影响及水平变化。方法18只SD大鼠急性分离左右两个三叉神经节,完整获取36个三叉神经节后,取12个用4%多聚甲醛固定,余下24个行体外培养培养6天后,分为正常组12个和实验组12个。正常组继续换液,对实验组的处理:将配制好一定浓度的肿瘤坏死因子(TNF-α)加入DMEM培养液中,与SD大鼠三叉神经节离体培养24 h。然后通过HE染色观察体外培养的三叉神经节组和新鲜未培养组的神经元的细胞变化,再通过免疫组化技术和蛋白技术两种方法,观察加入TNF-α前后CGRP的水平变化,分析TNF-α对体外培养三叉神经节的影响。结果1.新鲜未培养组和常规培养组的HE染色表明体外培养的三叉神经节神经元细胞未发生明显的组织细胞水肿、变性、坏死和细胞凋亡等病理学改变。2.蛋白印迹技术表明常规培养组和炎症因子实验组比,肿瘤坏死因子(TNF-α)使CGRP表达水平上调,差异有统计学意义(P0.01),进一步证明了炎症因子参与三叉神经痛的发病机制。3.免疫组化染色显示离体培养的三叉神经节对照组和实验组内都有CGRP免疫反应阳性细胞表达,对照组图表达量相对较低,实验组CGRP阳性反应细胞数表达水平显著增高,CGRP阳性细胞出现棕褐色,胞体染色深浅不一,部分细胞中心部位着色浅,周围胞浆点状着色较深。4.对CGRP的免疫组化切片图像进一步统计学分析,结果显示炎症因子实验组CGRP阳性反应细胞数除平均面积外,平均光密度、平均积分光密度、平均灰度值显著高于对照组(P0.01)结论炎性因子TNF-α可显著使离体培养的三叉神经节神经元CGRP表达水平上升。从细胞形态分析,离体培养的三叉神经节方法可行,并且能够易于控制三叉神经节组织生存的内环境,对于形态学和分子生物学研究易于实施,是一种三叉神经功能活动发生机制和药物开发研究的理想体外检测模型之一。
【关键词】：三叉神经痛 三叉神经节 体外培养 肿瘤坏死因子 降钙素基因相关肽
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R745.11
【目录】：

• 英文缩略表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 引言10-13
• 材料与方法13-21
• 结果21-26
• 讨论26-30
• 结论30
• 参考文献30-35
• 附录35-38
• 致谢38-39
• 综述39-45
• 参考文献43-45

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本文编号：750341