乙酰乙酸保护双氧水引起的PC12细胞氧化应激和细胞凋亡

发布时间：2017-08-31 22:05

  本文关键词：乙酰乙酸保护双氧水引起的PC12细胞氧化应激和细胞凋亡

  更多相关文章： 乙酰乙酸 过氧化氢 PC12细胞 氧化应激 细胞凋亡

【摘要】：本研究旨在探讨酮体成分之一乙酰乙酸对神经细胞氧化性损伤的保护作用及潜在的机制,以外源性过氧化氢处理建立神经细胞系PC12细胞氧化性损伤的体外模型,并在此基础上研究不同浓度的乙酰乙酸预处理对损伤的拮抗作用。实验结果发现,0.1-8.0 mmol/L的乙酰乙酸对PC12细胞无细胞毒性,说明这个浓度区间的乙酰乙酸可以作为后续实验安全剂量。通过MTT细胞活力分析、乳酸脱氢酶漏出实验以及Annexin V/PI凋亡分析结果发现,在150μmol/L的过氧化氢的刺激下,PC12细胞表现出氧化性损伤和细胞凋亡率增高,而乙酰乙酸预处理有效地抑制了过氧化氢引起的细胞损伤和细胞凋亡。过氧化氢引起的细胞凋亡主要与氧化应激及其介导的凋亡蛋白caspase-9和caspase-3激活有关。通过对胞内活性氧水平的分析(DCFH-DA荧光探针)、抗氧化酶SOD和CAT的的活力分析(酶活检测试剂盒)、凋亡蛋白caspase-9和caspase-3激活的分析(Western blot法)发现,0.5-4.0 mmol/L的乙酰乙酸预处理可以有效地抑制过氧化氢引起的氧化应激和凋亡蛋白激活。综合结果可以确认0.5-4.0 mmol/L的乙酰乙酸可以有效地减少过氧化氢诱导的PC12细胞细胞死亡和LDH漏出,降低细胞凋亡率,抵抗胞内活性氧的升高,恢复抗氧化酶活力,抑制凋亡蛋白的激活。总之,乙酰乙酸对过氧化氢引起的PC12神经细胞氧化应激损伤和细胞凋亡有良好的保护作用。本文为加深对乙酰乙酸的认识提供理论依据,同时为治疗神经退行性疾病或缺血缺氧再灌注损伤提供药物选择。
【关键词】：乙酰乙酸 过氧化氢 PC12细胞 氧化应激 细胞凋亡
【学位授予单位】：河北科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 第1章 绪论8-30
• 1.1 氧化应激与神经退行性疾病的关系8-18
• 1.1.1 作用效果8-12
• 1.1.2 氧化应激与各类疾病的关系12-14
• 1.1.3 细胞的凋亡14-18
• 1.2 PC12细胞的生物学特征18-19
• 1.3 酮体的研究现状19-28
• 1.3.1 酮体与癫痫20-21
• 1.3.2 酮体与阿兹海默病21-23
• 1.3.3 酮体与帕金森病23-26
• 1.3.4 酮体与肌萎缩侧索硬化症26-27
• 1.3.5 酮体与脊髓肌萎缩症27-28
• 1.4 本研究的思路、目的和意义28-30
• 第2章 乙酰乙酸对过氧化氢引起的PC12细胞死亡的保护作用30-42
• 2.1 材料和方法30-35
• 2.1.1 实验材料30
• 2.1.2 实验仪器设备30-31
• 2.1.3 PC12细胞的培养技术31-32
• 2.1.4 PC12细胞的技术方法32
• 2.1.5 MTT法检测乙酰乙酸对细胞的毒性作用32-33
• 2.1.6 MTT法检测乙酰乙酸对过氧化氢引起的细胞死亡的有效保护浓度33
• 2.1.7 LDH法检测乙酰乙酸对过氧化氢引起的细胞损伤的保护作用33-34
• 2.1.8 Annexin V/PI探针检测乙酰乙酸对过氧化氢引起的细胞死亡的有效保护浓度34-35
• 2.2 实验结果35-39
• 2.2.1 乙酰乙酸对细胞的毒性作用35-36
• 2.2.2 乙酰乙酸对过氧化氢引起的细胞死亡的保护作用36-37
• 2.2.3 乙酰乙酸对过氧化氢引起的细胞损伤的保护作用37-38
• 2.2.4 乙酰乙酸对过氧化氢引起的细胞调亡的保护作用38-39
• 2.3 讨论39-42
• 第3章 乙酰乙酸对过氧化氢引起的PC12细胞氧化应激和细胞凋亡的保护作用42-56
• 3.1 材料和方法42-49
• 3.1.1 实验材料42-43
• 3.1.2 实验仪器设备43
• 3.1.3 DCFH-DA荧光探针检测过氧化氢和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内活性氧水平的影响43-44
• 3.1.4 SOD活力检测试剂盒检测过氧化氢和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内抗氧化酶SOD活力变化的影响44-45
• 3.1.5 CAT活力检测试剂盒检测过氧化氢和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内抗氧化酶SOD活力变化的影响45-46
• 3.1.6 Western blot法检测过氧化氢和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内凋亡蛋白caspase-9、caspase-3 表达变化的影响46-49
• 3.2 实验结果49-53
• 3.2.1 乙酰乙酸对过氧活性引起的活性氧增高的抑制作用49-50
• 3.2.2 过氧化氢和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内抗氧化酶SOD活力的变化50-51
• 3.2.3 过氧化氢和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内抗氧化酶CAT活力的变化51-52
• 3.2.4 过氧化氢和和乙酰乙酸处理后PC12细胞胞内凋亡蛋白caspase-9、caspase-3 表达的变化52-53
• 3.3 讨论53-56
• 研究结论及展望56-58
• 参考文献58-64
• 致谢64-66
• 个人简历66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 韩茜;余玲;;氧化应激-线粒体功能异常与视网膜神经节细胞凋亡的关系[J];国际眼科杂志;2015年02期

，

本文编号：768173