重组骨桥蛋白的抗凋亡作用对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

发布时间：2017-09-04 03:29

  本文关键词：重组骨桥蛋白的抗凋亡作用对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的影响

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【摘要】：目的：研究重组骨桥蛋白(recombinant osteopontin, r-OPN)的抗凋亡作用对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)后脑血管痉挛(cerebral vasospasm, CVS)的抑制作用。方法：SD大鼠80只随机分为四组：假手术+安慰剂组(n=20)、SAH+安慰剂组(n=20)、SAH+OPN0.03组(0.03μg) (n=20)、SAH+OPN0.1组(0.1ug) (n=20)。采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH后CVS模型。第一次注血后30min,经侧脑室穿刺给药,SAH+OPN0.03组注入r-OPN 0.03μg (0.03μg/1μl磷酸盐缓冲液[phosphate buffer saline, PBS]), SAH+OPN0.1组注入r-OPN 0.1 μg (0.1μug/1μl PBS),假手术+安慰剂组、SAH+安慰剂组注入1μl PBS。在首次注血前、首次注血后24小时、48小时、72小时这四个时间点,比较各大鼠神经功能评分。首次注血后72小时,心脏灌注后开颅取脑干并固定,HE染色后测定基底动脉血管横截面积和管壁厚度,判断脑血管痉挛情况。原位细胞凋亡检测法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)检测基底动脉内皮细胞及平滑肌细胞凋亡情况。免疫组织化学法检测基底动脉p-Akt和cleaved caspase-3的表达。Western blotting检测大鼠基底动脉p-Akt、cleaved caspase-3、Bcl-2-相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、Bcl-2的表达。结果：SAH+安慰剂组与假手术+安慰剂组相比,24h、48h、72h神经功能评分明显更差(P0.01)。与SAH+安慰剂组相比,SAH+OPN0.1组48h和72h神经功能评分明显改善(P0.01)。SAH+安慰剂组与假手术+安慰剂组相比基底动脉横截面积明显减少(P0.01),管壁厚度明显增加(P0.01), SAH+OPN0.1组与SAH+安慰剂组相比较基底动脉横截面积有明显增加(P0.01),管壁厚度明显减小(P0.01), SAH+OPN0.03组与SAH+安慰剂组相比横截面积明显增加(P0.05),管壁厚度明显减小(P0.01)。SAH+安慰剂组与假手术+安慰剂组相比,基底动脉内皮细胞凋亡指数明显升高(P0.01)。与SAH+安慰剂组相比,SAH+OPN0.03组和SAH+OPN0.1组凋亡指数均明显降低(P0.01)。与假手术+安慰剂组相比,SAH+安慰剂组基底动脉cleaved caspase-3和Bax的表达明显增加(P0.01),而Bcl-2的表达明显降低(P0.01), SAH+OPN0.1组p-Akt表达明显增加(P0.01)。与SAH+安慰剂组相比,SAH+OPN0.1组cleaved caspase-3和Bax表达明显减少(P0.01),而p-Akt和Bcl-2的表达明显增加(P0.01), SAH+OPN0.03组cleaved caspase-3表达明显减少(P0.01),p-Akt表达明显增加(P0.05)。结论：SAH后应用r-OPN可以有效缓解CVS。其重要机制之一是通过激活Akt信号通路,并降低cleaved caspase-3和Bax的表达,增加Bcl-2的表达,从而减少血管内皮细胞和平滑肌细胞凋亡。SAH后应用r-OPN对改善神经功能有一定意义。
【关键词】：蛛网膜下腔出血 脑血管痉挛 重组骨桥蛋白 凋亡
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.35
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 缩略词表10-11
• 前言11-13
• 文献综述13-18
• 材料与方法18-28
• 实验结果28-39
• 1 死亡率28
• 2 神经功能评分28-29
• 3 大鼠蛛网膜下腔血液分布情况29
• 4 基底动脉形态学观察29-30
• 5 基底动脉横截面积30-31
• 6 基底动脉管壁厚度31-32
• 7 基底动脉内皮细胞凋亡情况32-33
• 8 凋亡指数33-34
• 9 免疫组化示基底动脉p-Akt和cleaved caspase-3的表达34-36
• 10 Western blot示基底动脉p-Akt、cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2的表达36-39
• 讨论39-43
• 结论43-44
• 参考文献44-48
• 作者简介48-49
• 致谢49

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