大鼠脑皮质星形胶质细胞的原代培养、纯化及采用HCA技术进行GFAP鉴定

发布时间：2017-09-05 10:06

  本文关键词：大鼠脑皮质星形胶质细胞的原代培养、纯化及采用HCA技术进行GFAP鉴定

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【摘要】：目的探索大鼠脑皮质星形胶质细胞(astrocyte,AS)的分离、原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)鉴定。方法取2、3 d的新生SD大鼠,体视显微镜下获取大脑皮质,机械分离成1 mm3组织碎块,采用质量分数为0.25%的胰蛋白酶和0.2%的胶原酶(体积比为1∶1)消化后进行体外培养,分别观察接种1 h、3 d、5 d后原代AS基本形态结构,酶消化3 min后,接种30 min,5 d后传代AS基本形态结构;采用多次、多阶段的差速贴壁和震荡相结合的方法纯化细胞;采用HCA技术对AS进行GFAP免疫细胞化学鉴定。结果采用本法培养的大鼠脑皮质星形胶质细胞,数量多、活性佳、纯度高,胞突丰富且细长,并相互交织成网,呈现典型而良好的生长状态;经本法纯化后的星形胶质细胞,细胞纯度明显提高;经HCA技术进行GFAP鉴定,AS纯度质量分数达98%以上,且图片质量佳。结论建立了一种大鼠脑皮质星形胶质细胞原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术进行GFAP鉴定的图片质量明显优于传统方法,该技术值得推广和应用。
【作者单位】： 湖南中医药大学第一附属医院;湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地;
【关键词】： 脑皮质 星形胶质细胞 原代培养 纯化 高内涵细胞成像分析技术(HCA) 鉴定 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)
【基金】：国家自然科学基金资助项目(81573965);国家自然科学基金资助项目(81403379) 湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验培育基地开放基金资助项目(ZYFT201401)
【分类号】：R741
【正文快照】：

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