黄芩苷通过调控孕激素水平发挥脑缺血保护作用的机制研究

发布时间：2017-09-07 21:04

  本文关键词：黄芩苷通过调控孕激素水平发挥脑缺血保护作用的机制研究

  更多相关文章： 缺血性脑损伤 黄芩苷 孕酮 脑保护 神经功能

【摘要】：目的缺血性脑血管疾病具有高发病率、高死亡率、高致残率、高复发率的特点。目前,国内外关于孕激素在缺血性脑血管疾病方面的基础研究领域较为成熟,并已经确定对脑缺血或者脑外伤的神经保护作用。其中最有代表性的孕激素就是孕酮。因其激素的副作用尚未在临床上展开应用。缺血性脑损伤属于中医的“中风”的范畴。传统中医药在治疗缺血性脑血管疾病临床有一定的疗效,大量研究表明,中药黄芩主要药效成分之一的黄芩苷不仅能增加孕酮水平,而且对中风有一定作用。本课题研究是在孕激素对缺血性脑损伤发挥保护作用的研究基础上,结合中医药相关的理论指导,以中药单体黄芩苷调节生物体内的孕酮水平为切入点,在体实验研究黄芩苷通过对雌性pMCAO大鼠体内孕酮的影响进而发挥脑保护作用的可能机制。具体分以下三部分：1.明确黄芩苷对缺血性脑损伤的保护作用；2.明确黄芩苷对正常及缺血性脑损伤大鼠孕酮及相关激素水平的调控作用；3.探讨黄芩苷发挥脑缺血保护作用的机制方法利用阴道涂片法选取动情周期规律的雌性SD大鼠为实验对象,且每只大鼠均在其动情期进行实验,制作左侧大脑半球永久性大脑中动脉栓塞(permanent middle cerebral artery occlusion, pMCAO)模型,成模后随机分为假手术组、模型组、黄芩苷组、孕酮组和黄芩苷加米非司酮组；另设正常组和正常加黄芩苷组。造模后24 h给药,正常加黄芩苷组和黄芩苷组均给予黄芩苷溶液腹腔注射,正常组、模型组和假手术组给予等量生理盐水腹腔注射,孕酮组给予黄体酮注射液肌注,黄芩苷加米非司酮组给予黄芩苷溶液腹腔注射和米非司酮溶液灌胃。分别于造模后不同时间点(造模后6小时、第1天、第5天和第10天)进行神经功能评分,并用抓力测定仪检测各组大鼠的前肢抓力,于造模后第10天采血和取脑组织,用TTC染色法检测大鼠脑梗死体积并计算其百分比,应用ELISA法检测血清中孕酮及其相关激素的水平。结果1.通过分析大鼠神经功能评分及前肢抓力变化率和脑梗死体积百分比明确黄芩昔对缺血性脑损伤的保护作用。(1)神经功能评分：与假手术组相比,造模6小时后大鼠出现神经功能缺损,造模各组神经功能评分无差异；各组造模后第1天时神经功能缺损均有所加重,造模第5天和第10天逐渐减轻；与假手术组相比,各时间点均有极显著性差异(P'0.001)。与模型组相比,大鼠神经功能在黄芩苷和孕酮治疗5天后均分别出现恢复的趋势(P0.05；P。0.05),10天后时较显著恢复(P0.05;P0.05)；(2)大鼠前肢抓力的变化率：与假手术组相比,造模后大鼠前肢抓力降低,各时间点均有极显著性差异(P0.001)。与模型组相比,大鼠前肢抓力在黄芩苷和孕酮治疗5天后均开始显著恢复(P0.01；P0.01),10天后极显著恢复(P0.001；P0.001)；(3)造模后第10天TTC染色结果发现,假手术组大鼠脑切片未见白色梗死灶,而模型组、黄芩苷组和孕酮组均出现不同程度的白色梗死灶,与模型组相比,黄芩苷组和孕酮组脑梗死体积百分比显著下降(P0.01；P0.05)。黄芩苷组与孕酮组的神经功能评分、大鼠前肢抓力的变化率和脑梗死体积百分比无组间差异(P0.05)。提示黄芩苷对缺血性脑损伤具有较好的保护作用。2.通过分析血清的孕酮及相关激素水平明确黄芩苷对正常及缺血性脑损伤大鼠激素水平的调控作用。ELISA法检测结果显示：造模第10天时取大鼠血清检测相关激素水平,与正常组相比,正常加黄芩苷组的孕酮(progesterone, PROG)水平有增加的趋势(P0.05),而促黄体生成素(luteinizing hormone, LH)的水平有所下降(P0.05),促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)的水平略有上升(P0.05)。与模型组比较,黄芩苷组的PROG水平较显著升高(P0.05),LH的水平有所下降(P0.05),FSH的水平略有上升(P0.05)。提示黄芩苷能上调正常组和模型组血清PROG水平；模型组与正常组相比,PROG水平略有增加,这可能属于脑缺血模型大鼠的应激反应性增加,而LH和FSH水平无明显变化。3.通过比较造模后黄芩苷组和黄芩苷加米非司酮组大鼠的神经功能评分、大鼠前肢抓力的变化率、脑梗死体积百分比和血清PROG水平,探讨黄芩苷是否通过孕酮环节发挥脑缺血保护作用。结果显示： (1)神经功能评分：黄芩苷对第10天时脑缺血大鼠神经功能起到较好改善作用,米非司酮在第10天时较显著抑制其改善作用(P0.05)；(2)大鼠前肢抓力的变化率：黄芩苷对第5天和第10天脑缺血大鼠的前肢抓力有较显著的恢复作用,米非司酮第5天和第10天时对抓力的恢复均有较显著抑制作用(P0.05；P0.05)；(3)造模后第10天TTC染色结果发现：黄芩苷组和黄芩苷加米非司酮组脑梗死体积百分比下降(P0.01；P0.05),其中黄芩苷加米非司酮组脑梗死体积百分比高于黄芩苷组(P0.05)。(4)ELISA法检测结果显示：黄芩苷显著上调PROG水平(P0.05),对LH的水平略下调和FSH的水平略有上调(P0.05；P0.05)；与黄芩苷组相比,米非司酮显著下调PROG水平(P0.05),对LH的水平和FSH的水平略有上调(P0.05；P0.05)。提示黄芩苷能上调模型大鼠的血清PROG水平,应用米非司酮对孕酮进行阻断后,脑缺血大鼠体内的PROG水平受到较显著地抑制。提示黄芩苷可能是通过影响孕酮水平这一环节来发挥脑保护作用的。结论黄芩苷对缺血性脑损伤大鼠模型发挥了降低神经功能评分、改善前肢抓力和减少脑梗死体积等脑保护作用并且上调血清的PROG水平,应用米非司酮对孕酮进行阻断后,黄芩苷的上述脑保护作用均显著受到抑制,提示黄芩苷可能是通过上调血清PROG水平而发挥脑保护作用的。
【关键词】：缺血性脑损伤 黄芩苷 孕酮 脑保护 神经功能
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要5-8
• ABSTRACT8-13
• 符号说明13-14
• 第一章 文献综述14-38
• 综述一 孕酮治疗脑血管疾病的研究进展14-29
• 1. 脑血管疾病概述14-15
• 2. 孕酮概述15-16
• 3. 孕酮治疗脑血管疾病的研究进展16-19
• 4. 展望19-20
• 参考文献20-29
• 综述二 黄芩苷治疗缺血性脑血管疾病的研究进展29-38
• 1. 引言29
• 2. 黄芩苷概述29-30
• 3. 黄芩苷治疗缺血性脑血管疾病的研究进展30-33
• 4. 黄芩苷对孕激素水平的调节作用33
• 5. 展望33
• 参考文献33-38
• 前言38-40
• 第二章 实验研究40-91
• 实验一 黄芩苷对大鼠缺血性脑损伤的保护作用40-56
• 实验流崟j_示意图40-41
• 材料41-43
• 方法43-49
• 结果49-53
• 小结53-54
• 讨论54-56
• 实验二 黄芩苷对正常及缺血性脑损伤大鼠血清孕酮及其相关激素水平的调控作用56-68
• 实验流程框架示意图56-57
• 材料57-59
• 方法59-62
• 结果62-64
• 小结64-65
• 讨论65-68
• 实验三 黄芩苷发挥脑缺血保护作用的机制68-85
• 实验流程程示意图68-69
• 材料69-71
• 方法71-75
• 结果75-83
• 小结83
• 讨论83-85
• 结语85-87
• 参考文献87-91
• 附录 中英文缩略词91-94
• 致谢94-96
• 在学期间主要研究成果96-98
• 个人简历98

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本文编号：809876