RIP1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成

发布时间：2017-09-07 23:25

  本文关键词：RIP1激酶参与缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成

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【摘要】：目的:研究necroptosis死亡的关键激酶RIP1K(receptor interaction protein 1kinase,RIP1K)在缺血性脑中风诱导的星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成中的作用,并研究其作用机制是否与调节星形胶质细胞的VEGFD-VEGFR3信号通路有关。方法:采用大鼠短暂性大脑中动脉阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,t MCAO)方法,建立大鼠星形胶质细胞增生及胶质瘢痕模型。模型前5天侧脑室注射慢病毒沉默RIP1K基因,以脑萎缩体积、行为学症状等指标评价大鼠脑中风后期的神经功能恢复情况。采用原代培养的新生大鼠皮层星形胶质细胞氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)再灌注的方法,建立体外星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成的细胞模型。星形胶质细胞与神经元co-culture法检测RIP1K基因沉默对神经元轴突的影响。LDH方法检测OGD再灌注诱导的星形胶质细胞乳酸脱氢酶漏出率。免疫荧光法、western blot法检测体内体外缺糖缺氧再灌注对星形胶质细胞增生及胶质瘢痕形成的标志蛋白GFAP、neurocan以及phosphacan表达情况。Western blot法及免疫荧光法观察星形胶质细胞RIP1K、VEGFD、VEGFR3表达情况。结果:术前5天给予RIP1K基因沉默病毒可有效减少t MCAO诱导的大鼠胶质瘢痕的形成,减少脑中风28天后脑萎缩体积(P0.01),及改善行为学症状(P0.01)。Western blot结果显示:t MCAO后皮层缺血区胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K表达上调(P0.01)。在RIP1K基因沉默后,免疫组化显示sh RIP1K可抑制皮层缺血区胶质瘢痕标志蛋白GFAP、neurocan、表达上调以及VEGFD、VEGFR3表达的上调(P0.01)。在星形胶质细胞氧糖剥夺再灌注的体外星形胶质细胞增生及胶质瘢痕模型,Western Blot结果显示:星形胶质细胞在OGD再灌注后,胶质瘢痕的标志蛋白GFAP、neurocan、phosphacan以及RIP1K、VEGFD、VEGFR3表达上调(P0.01),Elisa结果显示:在星形胶质细胞OGD/再灌注后,星形胶质细胞以及培养基中VEGFD表达较正常组均增加。RIP1K基因沉默可对抗OGD/再灌注引起的星形胶质细胞GFAP、neurocan、phosphacan、RIP1K表达变化,并减少VEGFD、VEGFR3表达的上调(P0.01)。在星形胶质细胞OGD/再灌注胶质瘢痕模型与神经元共培养系统中,LDH结果显示:RIP1K基因沉默可以抑制OGD/再灌注诱导的细胞乳酸脱氢酶漏出率(P0.01),促进神经元轴突的延伸(P0.01)。结论:1.抑制RIP1K可以促进缺血性脑中风后期神经功能的恢复,其作用可能与RIP1K基因沉默抑制星形胶质细胞增生及胶质瘢痕的形成有关。2.RIP1基因沉默抑制胶质瘢痕的形成的机制可能与抑制VEGFD-VEGFR3信号通路有关。
【关键词】：脑缺血 RIP1K 星形胶质细胞 胶质瘢痕 OGD tMCAO
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-14
• 第一部分RIP1K基因沉默对OGD-再灌注诱导的星形胶质细胞胶质瘢痕抑制作用以及促进神经元轴突的延伸14-27
• 材料和方法14-19
• 结果19-26
• 小结26-27
• 第二部分RIP1K基因沉默对tMCAO诱导的大鼠胶质瘢痕抑制作用以及促进脑缺血后期神经功能的恢复27-39
• 材料和方法27-30
• 结果30-38
• 小结38-39
• 第三部分RIP1 K通过影响VEGFD-VEGFR3 信号通路参与胶质瘢痕的形成39-46
• 材料和方法39-41
• 结果41-45
• 小结45-46
• 讨论46-50
• 结论50-51
• 参考文献51-58
• 综述 胶质瘢痕形成对缺血性脑中风的意义以及展望58-67
• 参考文献64-67
• 英文缩写词表67-68
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文及获得的资助68-69
• 致谢69-70

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本文编号：810518