黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响

发布时间：2017-09-09 19:05

  本文关键词：黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响

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【摘要】：目的探讨黄芩苷对肠上皮细胞缺氧复氧损伤后屏障功能的影响及其可能机制。方法建立大鼠小肠上皮细胞(IEC-6)缺氧复氧损伤模型,加入新鲜培养基和黄芩苷溶液,置常规培养箱24h。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,筛选黄芩苷浓度,设立对照组(A),缺氧复氧组(B),缺氧复氧+5.0×10-3mol/L黄芩苷组(C),缺氧复氧+1.0×103mol/L黄芩苷组(D),缺氧复氧+0.2×10-3mol/L黄芩苷组(E)：采用紫外线分光光度计检测细胞上清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量；采用酶联免疫吸附测定细胞上清中环磷酸腺苷(cAMP)含量；采用Western blot方法检测细胞紧密连接蛋白Occludin和Zonula Occludens 1(ZO-1)的表达及核因子-K B(NF-K B)、蛋白激酶A(PKA)蛋白表达水平；采用实时荧光定量(RT)PCR方法检测Occludin和ZO-1的mRNA表达水平。IEC-6细胞以2×105细胞/毫升的密度置入transwell小板中,使用微孔电阻系统测量跨细胞上皮电阻(TER)来评估单层上皮细胞的完整性,只有当TER值10000hm/well,表明单层上皮细胞层融合,再行缺氧复氧损伤模型的制备,分组处理后,再次使用微孔电阻系统测量跨细胞上皮电阻。结果MTT比色法显示黄芩苷可缓解缺氧复氧对细胞增殖的抑制(对照组吸光度值：0.442±0.015,缺氧复氧组：0.256±0.007,5.0×10-3mol／L黄芩苷组：0.407±0.008；P0.05)；缺氧复氧组较对照组细胞上清中MDA含量增加[对照组：(3.502±0.231)mol/L,缺氧复氧组：(5.541±0.143)mol/L；P0.05],SOD含量减少[对照组：(20.073±0.493)×103U/L,缺氧复氧组：(13.324±0.081) ×103U/L；P0.05],cAMP含量增加[对照组：(4.575±0.122)×10-3mol/,缺氧复氧组：(7.28±O.143)×10-a3mol/L,P0.05].Occludin和ZO-1的蛋白、mRNA表达量减少,NF-K B(P65).PKA蛋白表达量增加(P均0.05)；TER值减小(对照组：1177.5±26.30hm/well,缺氧复氧组：586.25±11.090hm/well:P 0.05).与缺氧复氧组相比,黄芩苷各组随黄芩苷浓度升高,细胞上清中MDA逐渐减少[5.0×10-3mol/L黄芩苷组：(4.320±0.106)mol/L,1.0×10-3mol/L黄芩苷组：(4.578±0.080)mol/L,0.2×10-3mol/L黄芩苷组：(4.928± 0.118)mol/L,F=110.796,P0.05],SOD增加[5.0×10-3mol/L黄芩苷组：(18.462±0.284)×103/L,1.0×10-3mol/L黄芩苷组：(16.624±0.364)× 103U/L,0.2×10-3mol/L黄芩苷组：(14.023±0.140)×103U/L,F=255.54,P 0.05],细胞上清中cAMP逐渐减少[5.0×10-3mol/L黄芩苷组：(5.155±0.152)× 10-3mol/L,1.0×10.3mol/L黄芩苷组：(6.27±0.168)×10-3mol/L,0.2×10-3mol/L黄芩苷组：(6.948±0.199)×10-3mol/L,F=211.77,P0.05].Occludin和Z0-1的蛋白、mRNA表达量增加,NF-K B(P65)、PKA蛋白表达量减少(P均0.05),TER值增大(5.0×10-3mol/L黄芩苷组：1105±31.090hm/well,1.0 ×10-3mol/L黄芩苷组：790±18.260hm/well,0.2×10-3mol/L黄芩苷组：619.5 ±14.980hm/well,F=255.54,P0.05).结论黄芩苷可缓解缺氧复氧损伤对肠上皮细胞屏障功能的破坏作用,其可能机制为通过NF-K B和cAMP/PKA信号通路。
【关键词】：黄芩苷 肠屏障 缺血再灌注 缺氧复氧 紧密连接蛋白
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743
【目录】：

• 英文缩略词及术语表4-5
• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-10
• 材料及方法10-24
• 结果24-31
• 讨论31-34
• 结论34-35
• 参考文献35-41
• 综述41-49
• 引用文献45-49
• 攻读学位期间发表的学术论文49-50
• 致谢50

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本文编号：822215