Fibulin-2在胶质瘤细胞中的作用及机制研究

发布时间：2017-09-14 14:24

  本文关键词：Fibulin-2在胶质瘤细胞中的作用及机制研究

  更多相关文章： 胶质瘤 fibulin-2 生物学行为 基因沉默 实时荧光定量PCR 蛋白免疫印迹

【摘要】：目的：研究Fibulin-2在脑胶质瘤标本瘤体与瘤旁中的表达差异及其对胶质瘤细胞系生物学行为的影响方法：应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)技术检测3例胶质瘤病理组织及瘤周组织中Fibulin-2 mRNA的表达,研究Fibulin-2的表达差异,各组指标因素之间的差异性比较用t检验。利用基因干扰技术,构建特异性干扰FBLN2基因的shRNA病毒载体,包装病毒感染胶质瘤细胞系U-87mg细胞,通过Real-time PCR及蛋白免疫印迹技术(western-blot)检测Fibulin-2表达降低后,通过CCK-8实验检测分析U87mg细胞增殖情况、通过流式细胞术分析U87mg细胞的凋亡情况,通过transwell小室检测U87mg细胞的侵袭性及迁移性；利用基因过表达技术,构建FBLN2过表达病毒载体,包装病毒后感染U87细胞,通过WB及real-time PCR技术检测到FBLN2基因表达增加后再通过上述实验检测U87细胞的增殖、凋亡、侵袭性及迁移性等生物学行为,各组因素指标问差异性比较用t检验,通过对比FBLN2干扰、正常、过表达后细胞生物学行为的变化,来研究FBLN2及其蛋白产物在胶质瘤发生、发展中的作用。结果：1.FBLN2 mRNA水平在胶质瘤组织显著低于瘤旁组织(p0.05,差异具有统计学意义)；2.FBLN2基因沉默后U87mg细胞的增殖能力相对于对照组减弱而过表达后相对于对照组U87mg的增殖性增强(P0.05,差异具有统计学意义)；3. FBLN2基因沉默后对U87mg细胞系的凋亡增强,而过表达后U-87mg的凋亡无明显差异；4. FBLN2基因沉默后U87mg细胞系的侵袭性增强(p0.05,差异具有统计学意义),而过表达后侵袭性减弱；5. FBLN2基因沉默U-87mg细胞系的迁移性增强(p0.05,差异具有统计学意义)而过表达后迁移能力减弱。结论：fibulin-2在胶质瘤病理组织中瘤体与瘤旁组织具有显著差别,肿瘤组织中fibulin-2的mRNA水平显著低于瘤周组织,在细胞系实验中,FBLN2基因过表达组细胞的增殖性增强于干扰组,凋亡无明显变化,侵袭性、迁移性：FBLN过表达组FBLN2正常组FBLN2干扰组。这与既往的文献报道在非转移性实体肿瘤中FBLN2作为抑癌基因的报道相同,提示fibulin-2与胶质瘤的进展可能相关。
【关键词】：胶质瘤 fibulin-2 生物学行为 基因沉默 实时荧光定量PCR 蛋白免疫印迹
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 缩略词表(以字母顺序排列)7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-18
• 第一部分 Fbln2在胶质瘤瘤体及瘤周组织中的表达差异检测18-27
• 实验目的18
• 实验材料、设备及试剂18-20
• 组织标本20-21
• 实验方法21-25
• 实验结果25-26
• 数据统计分析26-27
• 第二部分 胶质瘤细胞系培养及慢病毒载体构建筛选27-81
• 一. U-87细胞培养27-29
• 实验目的27
• 试剂、溶液、耗材、仪器、实验材料27-28
• 实验方法28-29
• 二. FBLN2过表达及干扰载体的构建及信息29-42
• 三. 质粒载体的转化、扩增及提取42-49
• 实验目的42
• 技术路线42
• 试剂、溶液、耗材、仪器42-44
• 实验方法44-47
• 实验结果47-48
• 质粒测序48-49
• 四. Fbln2过表达及干扰质粒转染U87mg细胞49-52
• 实验目的49
• 试剂，耗材，仪器49-50
• 实验方法50-52
• 五. Real-time PCR筛选Fbln2最佳干扰载体及检测过表达载体效率检测52-60
• 实验目的52
• 试剂、耗材、仪器52-54
• 实验方法54-57
• 实验结果57-59
• 数据统计分析59-60
• 六. WB筛选最佳Fibulin-2干扰载体及检测过表达载体效率检测60-69
• 实验目的60
• 试剂、溶液、仪器、耗材60-62
• 试剂配制62-63
• 实验方法63-68
• 实验结果68-69
• 七. 慢病毒包装69-71
• 实验目的69
• 试剂、耗材、仪器69-70
• 实验方法70-71
• 八. 慢病毒感染293Ta细胞验证慢病毒的有效性71-73
• 实验目的71
• 试剂、耗材、仪器71-72
• 实验方法72-73
• 九. Real-Time PCR检测慢病毒感染后293Ta细胞FBLN2表达效率73-81
• 实验目的73
• 试剂、洛液、耗材、仪器73-75
• 实验方法75-79
• 实验结果79-80
• 数据统计分析80-81
• 第三部分 Fibulin-2干扰及过表达后对U87mg细胞生物学行为的影响81-99
• 一. cck-8法检测Fibulin-2干扰和过表达对U87mg细胞的增殖影响81-85
• 实验目的81
• 试剂，，耗材81-82
• 实验方法82-83
• 实验结果83-84
• 数据统计分析84-85
• 二 流式细胞术检测Fibulin-2过表达及干扰对U87mg细胞凋亡的影响85-90
• 实验方法85
• 试剂、耗材、仪器85-86
• 实验方法86
• 实验结果86-90
• 三 transwel小室检测Fibulin-2干扰和过表达对U87mg细胞侵袭的影响90-94
• 实验目的90
• 试剂，耗材90-91
• 实验方法91-92
• 实验结果92-94
• 数据统计分析94
• 四 transwel小室检测Fibulin-2干扰和过表达对U87mg细胞迁移的影响94-99
• 实验目的94
• 试剂、耗材94-95
• 实验方法95-97
• 实验结果97-98
• 数据统计分析98-99
• 讨论99-102
• 结论102-103
• 参考文献103-108
• 综述108-115
• 参考文献112-115
• 攻读学位期间获得的学术成果115-116
• 致谢116

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本文编号：850542