miR-505-3p在小鼠胚胎成纤维细胞中抑制可变剪接因子以调控运动神经元存活基因可变剪接

发布时间：2017-09-15 18:10

  本文关键词：miR-505-3p在小鼠胚胎成纤维细胞中抑制可变剪接因子以调控运动神经元存活基因可变剪接

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【摘要】：目的探究微小RNA 505-3p(miR-505-3p)对于运动神经元存活基因(survival motor neuron gene,SMN)可变剪接的影响。方法利用生物信息学数据库预测miR-505-3p靶基因,构建双荧光素酶报告载体,在小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)中验证靶基因为可变剪接因子(alternative splicing factor,ASF)基因,运用免疫印迹和免疫荧光染色验证miR-505-3p对ASF的抑制效果,利用实时定量PCR技术检测miR-505-3p对具有正常功能的全长SMN(SMN-FL)以及含有毒性的第7号外显子缺失的SMN(SMN-D7)表达量的影响及ASF在其中的作用。结果 miR-505-3P直接结合ASF3'端调控区并抑制ASF mRNA及蛋白表达量,抑制ASF蛋白在细胞核中的表达和分布。过表达miR-505-3p促进SMN-FL向SMND7的转化,而过表达靶基因ASF或者抑制miR-505-3p促进SMN-FL的保留。结论 ASF对SMN基因正常剪接形成SMNFL是必需的,miR-505-3p通过抑制ASF,从而干扰ASF对于SMN可变剪接的调控,导致正常的SMN-FL向毒性的SMN-D7转化。
【作者单位】： 东华大学环境科学与工程学院;东华大学化学化工与生物工程学院;
【关键词】： miR--p 可变剪接因子 运动神经元存活基因 鼠胚胎成纤维细胞
【基金】：国家自然科学基金(3131257) 上海市科委重点项目(14140900502) 东华大学研究生创新基金(DH-D-2014049)
【分类号】：R741
【正文快照】： 微小RNA(miRNA)是一类短小而保守的非编 码RNA,通过靶向结合mRNA的3’非编码区(3’UTR区),对靶基因实行转录后及翻译水平的抑制⑴。小鼠miR-505基因位于X染色体上(物理位 置:6039240360392492),其转录初级体(pri-505)长90bp,前体(pre_505)长56bp。miR_505_3p和miR_ 505-5P

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本文编号：858087