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Omega-3鱼油脂肪乳对缺氧缺血脑损伤新生大鼠海马组织TLR4和NF-κB表达的影响

发布时间:2017-09-18 05:19

  本文关键词:Omega-3鱼油脂肪乳对缺氧缺血脑损伤新生大鼠海马组织TLR4和NF-κB表达的影响


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【摘要】:背景 新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)常可引起不可逆的脑组织损伤,疾病进程中大量释放的炎症因子是促进二次脑损伤发生的重要因素,然而迄今为止除亚低温治疗外尚无满意的治疗措施,因此找到一个安全有效的治疗措施显得十分重要。研究证实给予富含Omega-3鱼油脂肪乳补充能显著改善颅脑缺血的疾病进展及预后,且重点添加DHA的Omega-3鱼油脂肪乳是脑内合成神经保护素D1(NeuroprotectinD1,NPD1)的重要来源。HIE治疗时需要肠外营养来满足患儿能量需求,因此能否在供能的同时又能遏制疾病的发展,及初步探讨Omega-3鱼油脂肪乳的抗炎作用机制成了本实验的出发点。目的 探讨Omega-3鱼油脂肪乳对新生7日龄大鼠缺氧缺血脑损伤是否具有保护作用。方法 出生7日龄SD大鼠168只,随机分为4组,每组42只,假手术组;Omega-3鱼油脂肪乳组;20%普通脂肪乳组;模型组。Omega-3鱼油脂肪乳组、20%普通脂肪乳组和模型组按照RICE法制备新生大鼠缺氧缺血脑损伤模型,7日龄新生大鼠,乙醚麻醉,游离分出左侧颈总动脉,结扎,置于含8%氧气的氮氧混合气体37℃的密闭容器中2h。假手术组仅暴露左侧颈总动脉,不行特殊处理。于模型制备后1d、3d、7d时取脑组织,Real-time PCR和Western-Blot检测大鼠海马组织中Toll样受体4(Toll-like receptor4,TLR4)和核心因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)mRNA及蛋白的表达量,TUNEL染色分别对比观察不同组间大鼠脑组织中细胞凋亡情况。结果1.模型评价:Omega-3鱼油脂肪乳组、20%普通脂肪乳组和模型组在模型制备后大鼠均可出现站立不稳、固定左旋等现象,而假手术组大鼠未见站立不稳、固定左旋等现象,TTC染色可见Omega-3鱼油脂肪乳组、20%普通脂肪乳组和模型组的大鼠脑片均可见大片状白色缺血梗死灶,而假手术组大鼠脑片为均一红色,未见白色梗死灶,提示模型建立成功。2.苏木素-伊红(he)染色,结果显示模型组细胞水肿较各组严重:he染色用来观察缺氧缺血后脑组织的病理学改变,3d时海马ca1区病理学表现最为显著,omega-3鱼油脂肪乳组和20%普通脂肪乳组均可见不同程度细胞水肿、锥体细胞排列紊乱、核固缩等病理表现,20%普通脂肪乳组和模型组病理表现更为显著,假手术组锥体细胞排列整齐,未见细胞水肿、核固缩等病理表现。3.real-timepcr结果显示omega-3鱼油脂肪乳能下调tlr4和nf-Κbmrna的表达量:1d时模型组tlr4和nf-κb的mrna表达量均高于假手术组(p均=0.00,p0.05);3d时omega-3鱼油脂肪乳组tlr4和nf-κb的mrna的表达量[(4.89±0.51),(1.15±0.10)]低于20%普通脂肪乳组[(17.58±2.50),(2.56±0.10)]和d组[(15.94±2.52),(2.34±0.11)](p均=0.00,p0.05),与假手术组[(6.30±1.52),(1.32±0.10)]相比无统计学意义(p=0.376,0.21,p0.05);7d时omega-3鱼油脂肪乳组tlr4和nf-κb的mrna表达量低于20%普通脂肪乳组(p=0.03,0.04,p0.05)和模型组(p均=0.00,p0.05),与假手术组相比无统计学意义(p=0.23,0.08,p0.05)。4.omega-3鱼油脂肪乳能显著降低tlr4和nf-Κb的蛋白表达:采用免疫印迹检测四组tlr4和nf-κb表达变化,gapdh作为内参,结果表明1d时模型组tlr4和nf-κb的蛋白的表达量均高于假手术组(p均=0.00,p0.05);3d时omega-3鱼油脂肪乳组tlr4和nf-κb蛋白的表达量[(9.30±1.53),(1.44±0.14)]低于20%普通脂肪乳组[(20.13±1.00),(2.82±0.09)]和模型组[(26.21±3.00),(4.51±0.36)](p均=0.00,p0.05),与a组[(5.32±1.06),(2.42±0.14)]相比无统计学意义(p=0.2,0.17,p0.05);7d时omega-3鱼油脂肪乳组tlr4和nf-κb蛋白的表达量低于20%普通脂肪乳组(p=0.00,0.02,p0.05)和模型组(p均=0.00,p0.05),与a组相比无统计学意义(p=0.21,0.33,p0.05)。5.脑组织凋亡细胞计数3d时脑组织凋亡细胞数:omega-3鱼油脂肪乳组细胞凋亡数目(13.67±2.52)少于20%普通脂肪乳组(27.67±2.52)和模型组(41.00±3.61)差异有统计意义(p均=0.00,p0.05),与假手术组(6.00±2.00)相比(p=0.09,p0.05)差别无统计学意义。结论Omega-3鱼油脂肪乳能够减轻缺氧缺血脑损伤而发挥神经保护作用,其作用机制与下调TLR4、NF-κB表达和减少细胞凋亡有关。
【关键词】:大鼠 新生 Omega-3鱼油脂肪乳 缺氧缺血脑损伤 TLR4 NF-κB
【学位授予单位】:新乡医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R742
【目录】:
  • 摘要5-8
  • Abstract8-11
  • 前言11-12
  • 1 材料与方法12-19
  • 2 实验结果19-22
  • 3 讨论22-28
  • 4 小结28-29
  • 附表及附图29-34
  • 参考文献34-39
  • 综述 Omega-3鱼油脂肪乳和新生儿缺氧缺血性脑病研究进展39-58
  • 参考文献49-58
  • 附录中英文缩写词表58-59
  • 攻读学位期间发表文章情况59-60
  • 致谢60-61
  • 个人简历61

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本文编号:873614

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