MiR-29c在大鼠蛛网膜下腔出血后抑制柔脑膜纤维化的实验研究

发布时间：2017-09-22 02:14

  本文关键词：MiR-29c在大鼠蛛网膜下腔出血后抑制柔脑膜纤维化的实验研究

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【摘要】：背景蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)是第三位急性脑血管事件,其发生率仅次于脑梗死和脑出血。慢性交通性脑积水是蛛网膜下腔出血后常见并发症之一,文献报道发生率在8%～67%,可严重影响患者预后。目前认为,柔脑膜纤维化是蛛网膜下腔出血后慢性交通性脑积水发生的主要原因。microRNA是一类长度约18～25个核苷酸的内源性非编码调控单链小RNA分子,主要功能是通过结合靶基因mRNA,抑制靶基因转录或促使靶基因降解,从而抑制基因表达。miR-29家族成员包括miR-29a、miR-29b-1、miR-29b-2、 miR-29c。除参与肿瘤生长、细胞衰老及分化过程外,抑制组织器官纤维化是目前文献报道miR-29家族主要功能。在肝脏、肾脏、心脏、肺等组织器官纤维化过程中,miR-29家族表达均下调。本课题组前期研究发现,实验性蛛网膜下腔出血大鼠柔脑膜中miR-29c表达亦存在下调,miR-29a、miR-29 b表达无统计学意义。本实验拟利用慢病毒感染的方式使miR-29c过表达,观察miR-29c对柔脑膜纤维化的影响。目的通过观察高表达miR-29c后实验性蛛网膜下腔出血大鼠柔脑膜内胶原蛋白及脑脊液中PICP的表达情况,探讨miR-29c在蛛网膜下腔出血(SAH)后柔脑膜纤维化过程中的作用。方法选用(300±20)g健康雄性SD大鼠26只按随机数字表法分为假手术组(6只)、空白慢病毒组(8只)、LV-rno-miRNA-29c组(12只)。侧脑室内分别注入5μL生理盐水、5μL空白慢病毒、5 μ L LV-rno-miRNA-29c。注射1周后,通过枕大池二次注血法建立蛛网膜下腔出血模型。造模21d后处死大鼠,采集大鼠柔脑膜及脑脊液标本,采用Realtime PCR法检测柔脑膜内转化生长因子β1(TGF-β1)及miR-29c表达量,酶联免疫吸附法(Elisa)检测脑脊液(CSF)中Ⅰ型胶原前端肽(procollagen I C-Terminal propeptide, PICP)含量,柔脑膜Masson染色观察柔脑膜胶原纤维。结果1. Realtime PCR检测发现,空白慢病毒组柔脑膜中TGF-β1mRNA表达显著高于假手术组(0.0209±0.0018VS0.0025±0.0008,P0.05),miR-29c呈表达下调(0.0148±0.0054 VS 0.0177±0.0031,P0.05)。2.酶联免疫吸附法检测发现,LV-rno-miRNA-29c组脑脊液中PICP表达低于空白慢病毒组[(181.79±14.34)VS(255.16±20.10),P0.01] ug/L。3.柔脑膜Masson染色发现,高表达miR-29c后纤维化指标较空白慢病毒组显著减小(77.64±6.43 vs 108.29±7.69,P0.01)。结论1.SAH模型大鼠柔脑膜内TGF-β1表达升高,miR-29c表达降低。2. LV-rno-miRNA-29c组大鼠慢病毒成功高表达柔脑膜内miR-29c。3.维持miR-29c高表达可抑制SAH后柔脑膜内胶原合成及脑脊液内PICP释放,从而减少细胞外基质形成,有效控制柔脑膜纤维化的形成。
【关键词】：柔脑膜纤维化 蛛网膜下腔出血 脑积水 TGF-β1 微RNAs
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.35
【目录】：

• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 符号说明10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-21
• 1 材料13-14
• 2 实验方法14-21
• 3 统计学分析21
• 结果21-24
• 讨论24-31
• 1. MicroRNA-29家族与纤维化疾病24-30
• 2. 本研究结果的探讨30-31
• 结论31-32
• 参考文献32-37
• 综述 TGF-β1在组织器官纤维化过程中的研究现状37-42
• 参考文献40-42
• 附图42-45
• 致谢45-46
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文46-47
• 附件47

【参考文献】

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1 李合华;李彤;韩素改;刘传宝;魏丽红;张平;闫海清;常丽;贵永X;禹萌;;转化生长因子-β_1对大鼠脑膜间皮细胞结缔组织因子表达的影响[J];中华脑科疾病与康复杂志(电子版);2011年02期

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本文编号：898197