GSK3β调节神经细胞自噬在帕金森病发病中的作用及机制研究

发布时间：2017-09-23 19:20

  本文关键词：GSK3β调节神经细胞自噬在帕金森病发病中的作用及机制研究

  更多相关文章： 帕金森病 GSK3β α-synuclein 自噬

【摘要】：目的:筛选稳定表达A30Pα-synuclein的PC12细胞株为研究对象,通过细胞和分子水平的实验,初步探讨表达不同活性的GSK3β对自噬通路的调节是否会引起α-synuclein自噬水平的变化及其对细胞生长的影响。方法:1.将A30Pα-synuclein质粒转染至生长状态良好的PC12细胞,并通过G418筛选稳定表达细胞。2.脂质体法将GSK-3β过表达质粒、GSK-3β沉默质粒及空白质粒转染至A30Pα-synuclein的PC12细胞株,筛选不同稳定表达GSK3β活性的细胞株,Werstern blot检测GSK-3β转染后的表达情况,验证转染效率。3.Western blot检测各组细胞中LC-3Ⅱ、Beclin1、α-synuclein的表达。4.MTT法检测细胞增殖能力的变化。5.TUNEL法检测细胞凋亡变化。结果:1.GSK3β过表达组与GSK3β沉默组、空白质粒组、空白对照组相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);α-synuclein的表达减少,差异有统计学意义(P0.05);MTT及TUNEL法结果表明细胞的凋亡减少,存活增多,差异有统计学意义(P0.05)。2.GSK3β沉默组与GSK3β沉默组、空白质粒组、空白对照组相比:LC-3Ⅱ及Beclin1的表达减少,差异有统计学意义(P0.05);α-synuclein的表达增加,差异有统计学意义(P0.05);MTT及TUNEL法结果表明细胞的凋亡增多,存活减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论:GSK-3β可增加稳定表达A30Pα-synuclein的PC12细胞的自噬水平,从而有助于细胞的存活。
【关键词】：帕金森病 GSK3β α-synuclein 自噬
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 主要缩略词9-10
• 第一章 前言10-14
• 第二章 材料与方法14-26
• 一、材料14-19
• 二、 实验方法19-26
• 第三章 实验结果26-32
• 一、G418 筛选获得稳定表达 A30P a-synuclein 细胞（图 3.1）26
• 二、Western blot 检测 GSK-3β的蛋白的表达，，验证转染效率26-27
• 三、荧光显微镜观察细胞转染效率27
• 四、Western blot 检测转染后 LC3II，Beclin1，A-synuclein的表达情况27-30
• 五、MTT 检测转染后细胞的增殖活性30-31
• 六、TUNEL 法检测细胞凋亡31-32
• 第四章 讨论32-36
• 第五章 结论36-38
• 参考文献38-42
• 附图42-46
• 综述46-55
• 参考文献51-55
• 成果目录55-56
• 致谢56

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本文编号：907049