miR-584对人胶质母细胞瘤侵袭和迁移能力的影响

发布时间：2017-09-25 01:46

  本文关键词：miR-584对人胶质母细胞瘤侵袭和迁移能力的影响

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【摘要】：研究背景和目的microRNAs是一类广泛存在于动植物细胞内的内源性非编码基因,大小约21-25个碱基,它可以调控转录后的基因表达,对肿瘤的发生发展具有重要作用。当前研究显示microRNAs对肿瘤的发生发展及凋亡、侵袭等生物学行为具有调控作用,随着对microRNAs研究的进一步深入,microRNAs有望成为肿瘤诊断、治疗及判断预后的靶点及分子标志。现研究证实,microRNAs与胶质瘤的关系密切。本实验的目的为探讨miR-584对人胶质母细胞瘤U251细胞侵袭和迁移能力的影响。方法(1)细胞培养用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养细胞,置于37℃、5%C02培养箱中,培养细胞汇合率达60%-70%时进行细胞转染,步骤参照美国Invitrogen公司的Lipofectamine2000说明书进行,转染浓度为5ug/孔。(2)实验转染及分组将化学合成的miR-584-3p在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,瞬时转染人胶质母细胞瘤U251细胞,实验分为空白对照组(无转染,其他条件相同)、mimics NC组(转染miR-584-3p mimics阴性对照序列)、miR-584-3pmimics组(转染miR-584-3p mimics)、inhibitor NC组(转染miR-584-3p inhibitor阴性对照序列)和miR-584-3p inhibitor组(转染miR-584-3p inhibitor).(3)microRNA提取和反转录转染后48h,按照Trizol试剂说明书提取各组细胞的microRNA。反应条件：37℃反应15min,98℃反应5min,4℃维持。可将反转录产物置于—20℃保存备用。(4) Real-time PCR法检测细胞中miR-584-3p的表达水平；按照SYBR(R) Green Ⅰ嵌合荧光法Real-time PCR试剂盒说明书操作,以U6为内参,1niR-584-3p的相对表达量以2-△△ct表示,计算各个样品的表达量。(5)CCK-8法检测细胞增殖能力。(6)划痕实验和Transwell小室实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力。结果与空白对照组和]mimics NC组相比,miR-584-3p mimics组的miR-584-3p表达上调约100倍(P0.05),细胞增殖能力无明显差异(P0.05),细胞侵袭和迁移能力明显下降(P0.05);与空白对照组和inhibitor NC组相比,miR-584-3p inhibitor组的miR-584-3p表达下调至空白对照组的5%(P0.05),细胞增殖能力无明显差异(P0.05),细胞侵袭和迁移能力显著增强(P0.05)。结论miR-584-3p mimics转染后抑制了U251细胞的侵袭和迁移能力；miR-584-3p inhibitor转染后能增强了U251细胞的侵袭和迁移能力。因此,miR-584-3p可能成为胶质瘤基因治疗的新靶点。
【关键词】：miR-584 胶质母细胞瘤 侵袭 迁移
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符号说明11-13
• 前言13-15
• 材料与方法15-24
• 结果24-26
• 讨论26-29
• 结论29-30
• 附图30-34
• 参考文献34-37
• 综述37-54
• 参考文献44-54
• 致谢54-55
• 攻读硕士学位期间发表的论文55-56
• 附件56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;MicroRNAs in neural cell development and brain diseases[J];Science China(Life Sciences);2011年12期

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本文编号：914687