P120ctn在冲击流场引发血管内皮损伤中的作用

发布时间：2017-09-28 10:28

  本文关键词：P120ctn在冲击流场引发血管内皮损伤中的作用

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【摘要】：目的:颅内动脉瘤的形成机制目前仍不清楚。我们前期研究发现表明血流动力学改变所致的血管内皮损伤所致的血管壁重构是颅内动脉瘤形成的主要病理生理环节,且在动脉瘤的形成过程中VE-cadherin与P120 catenin(P120ctn)在血管内膜的表达进行性下降。本课题通过体外培养的细胞在冲击流场作用下,检测血流动力学因素对P120 ctn及相关蛋白表达的影响,探讨血流动力学因素参与颅内动脉瘤形成的可能。方法:自行设计的T型流室系统可模拟血管分叉处的血流环境,并通过提供不同流速的冲击流体,在流室内创造不同条件的血流动力学环境。体外培养人类脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)及运用Si RNA干扰技术敲除P120ctn基因片段后的HUVEC。将细胞种植在22×50mm的载玻片上,待细胞汇合度达到85-95%后将载玻片置入流室,在250ml/min和500ml/min的流速作用下,观察3小时、6小时和12小时处理后,HUVEC细胞形态、生长方式,及P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、MMP-2、α-catenin和β-catenin的表达情况。结果:正常HUVEC在冲击流作用12小时后仍可维持正常贴壁生长。加载250ml/min的流速,作用12小时后冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,细胞分布未见明显改变。加载流速500ml/min,6小时后冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,细胞分布未见明显改变。12小时后,可见冲击点处的细胞过度融合,细胞间隙变窄。高切应力(WSS)和高切应力梯度(WSSG)区的细胞密度下降且形态被拉长,部分细胞向下游迁徙,排列与冲击流方向平行一致。两种流速加载12小时后,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso和α-catenin表达下降,β-catenin表达未见明显变化,MMP-2表达升高;其中P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2的变化具有统计学意义(P0.05)。P120ctn敲除后的HUVEC在流室内生长时间短于正常HUVEC。加载250ml/min的流速,1小时以内冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,但高WSS及高WSSG区域部分细胞开始向下游移动并聚集,细胞排列方式部分随流体方向排列。加载500ml/min时,30分钟以内冲击点及其周围的细胞仍维持着多边形,细胞分布未见明显改变。1小时后,可见高切应力(WSS)和高切应力梯度(WSSG)区的细胞密度明显下降且形态被拉长,大量细胞向下游迁徙并集聚,排列与冲击流方向平行一致。加载两种流速作用1小时后,VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin表达下降,β-catenin表达无明显变化,MMP-2表达升高;其中VE-Cadherin、Kaiso以及MMP-2的表达改变具有统计学意义(P0.01)。空病毒对照组在加载250ml/min和500ml/min后,细胞形态和生长方式与正常对照组相比未见明显改变,P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso、α-catenin,β-catenin和MMP-2的表达也未见明显改变(P0.05)。结论:血管内皮损伤多发生于高WSS及高WSSG的区域。血流动力学的改变可以引起血管内皮细胞在形态、生长方式及相关蛋白表达的改变,进而导致血管内皮细胞间黏附连接稳定性的下降及相关致炎因子的表达改变。P120ctn敲除导致血管内皮细胞黏附连接稳定性的进一步降低。
【关键词】：颅内动脉瘤 血流动力学 血管内皮细胞 P120ctn 血管壁切应力 血管壁切应力变化梯度
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文缩略词表9-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 材料与方法12-25
• 2.1 研究对象及细胞株12
• 2.2 慢病毒载体12
• 2.3 主要仪器12-13
• 2.4 主要试剂13-14
• 2.4.1 细胞培养主要试剂13
• 2.4.2 Western Blot实验主要试剂13-14
• 2.5 主要试剂的配制14-17
• 2.5.1 冲击流体的配置14
• 2.5.2 细胞培养主要试剂配制14-15
• 2.5.3 Western Blot实验主要试剂配制15-17
• 2.6 实验方法17-24
• 2.6.1 细胞培养17-18
• 2.6.2 慢病毒细胞转染18-19
• 2.6.3 蛋白印记19-21
• 2.6.4 冲击流场的加载21-24
• 2.7 统计学分析24-25
• 第3章 结果25-41
• 3.1 流室内参数模拟25-27
• 3.2 慢病毒转染情况27-28
• 3.3 冲击流场作用下，，HUVEC形态学及生长方式的改变28-34
• 3.3.1 正常HUVEC28-31
• 3.3.2 P120ctn敲除的HUVEC31-34
• 3.4 冲击流场作用下，P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso等相关蛋白的表达34-41
• 3.4.1 正常 HUVEC34-37
• 3.4.2 P120ctn敲除HUVEC37-41
• 第4章 讨论41-47
• 4.1 血管内皮细胞形态与功能的改变引发血管内皮损伤的机制41-42
• 4.2 P120ctn、VE-Cadherin、Kaiso及MMP-2 表达改变引发血管内皮损伤的可能机制42-44
• 4.3 血流动力学的改变引发血管内皮细胞损伤的可能机制44-46
• 4.4 本实验结果的意义46-47
• 第5章 结论与展望47-49
• 5.1 结论47
• 5.2 展望47-49
• 致谢49-50
• 参考文献50-53
• 攻读学位期间的研究成果53-54
• 综述54-63
• 参考文献61-63

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