NUSAP1在脑胶质瘤中的表达以及对脑胶质瘤细胞功能的影响

发布时间：2017-09-30 12:30

  本文关键词：NUSAP1在脑胶质瘤中的表达以及对脑胶质瘤细胞功能的影响

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【摘要】：背景脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤,约占中枢神经系统肿瘤的40%,具有高度的侵袭性,术后易复发,恶性程度逐渐加重等特点。胶质瘤的临床治疗仍以手术切除病灶为主,结合放疗和化疗联合治疗,对脑胶质瘤的治疗起到了一定的疗效。但是由于胶质瘤高度的侵袭性,血供丰富,手术治疗脑胶质瘤并不能完全切除病灶,术后易复发,并且复发间隔时间逐渐缩短,对于高级别胶质瘤(WHO分级Ⅲ级,Ⅳ级)患者,5年存活率不足10%。目前脑胶质瘤的发病机制尚未不清楚。因此,有必要进一步深入探究脑胶质瘤的发病机制,以及其发展、侵袭的分子生物学基础,从而能够找到新的生物标志物或者治疗靶点,及早预测脑胶质瘤及其复发的危险性,改善患者的预后。核仁主轴相关蛋白1(nucleolar spindle—associated proteinl, NuSAP1)是一种调控细胞周期蛋白,能够促进微管聚集,对纺锤体的组装和形成起到重要作用,NUSAP1蛋白表达量在G2期达到高峰,细胞进入分裂期后,其表达量下降,在细胞周期中呈周期性变化,对细胞增殖起关键作用,NUSAP1首次于2003年被发现,随着对其进一步的研究,在乳腺癌、前列腺癌、肺癌等许多肿瘤组织和肿瘤细胞株中都发现存在过表达情况,他的表达情况往往影响肿瘤的侵袭、增殖以及病人的预后情况,目前关于NUSAP1在脑胶质瘤中的表达尚无研究,NUSAP1对于脑胶质瘤的发生发展、侵袭性的影响,患者的预后也没有相关报道。目的NUSAP1在细胞周期中起到重要的调控作用,并且在许多肿瘤中都呈现出过表达状态,因此,NUSAP1功能紊乱可能和肿瘤的发生发展存在着密切的关联,本实验从组织水平,细胞水平以及动物水平研究NUSAP1在脑胶质瘤中的表达,分析NUSAP1对脑胶质瘤细胞株功能的影响及其分子机制。方法(1).收集手术切除的新鲜脑胶质瘤样本30例,正常脑组织(癫痫病灶)样本10例,采用实时定量PCR, Western-blot,免疫组化检测胶质瘤组织和正常组织中NUSAP1的表达量。(2).通过Western-blot检测正常胶质细胞株(HEB)和胶质瘤细胞株(LN229、 T98G, U87、U251)中NUSAP1的表达,利用SiRNA和慢病毒敲除胶质瘤细胞株中NUSAP1基因,构建沉默NUSAP1基因的稳定胶质瘤细胞株。(3).采用CCK-8法检测细胞增殖变化,transwell法检测细胞侵袭能力；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡变化,并研究导致其凋亡的分子机制。结果(1). NUSAP1在脑胶质瘤组织样本中呈过表达,并且其表达程度有随着胶质瘤级别的升高而增强的趋势,在正常脑组织中则表达不明显。(2). NUSAP1在胶质瘤细胞株中也呈过表达状态,抑制细胞中的NUSAP1的表达会导致细胞增殖、侵袭能力下降,并且导致细胞凋亡增加,细胞周期紊乱,停滞于G1期的细胞增多。(3).通过Western-blot检测凋亡指标发现p21、p53基因在抑制NUSAP1表达的LN229细胞中的表达量增加,同时caspase3、caspase8也在抑制NUSAP1表达的LN229细胞中表达量增加。结论我们通过研究首次发现NUSAP1在脑胶质瘤中过表达,抑制胶质瘤细胞株中NUSAP1的表达可导致细胞停滞于G1期,其增殖、侵袭能力下降,细胞凋亡增加,在NUSAP1表达受到抑制的LN229细胞中,我们发现其p21、p53、caspase3、 caspase8表达量升高,p21基因能够和p53基因共同构成G1期检查站,由于抑制NUSAP1表达,细胞停滞于G1期,这可能激活了p21基因介导的凋亡通路,并通过caspase8启动凋亡程序,NUSAP1很可能作为癌基因或者能够激活癌基因导致了脑胶质瘤的发生发展,NUSAP1也有可能为今后脑胶质瘤的治疗提供了新的药物治疗靶点促进肿瘤细胞的凋亡。
【关键词】：胶质瘤 核仁主轴相关蛋白1 细胞周期 细胞凋亡
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-25
• 结果25-40
• 讨论40-42
• 小结42-43
• 参考文献43-47
• 综述47-57
• 参考文献51-57
• 攻读学位期间发表文章情况57-58
• 主要缩略词中英文对照58-59
• 致谢59-60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张猛;杨定华;刘萧;刘延;梁鉴坤;;Nusap1蛋白在肝癌中的表达及其临床意义[J];中南大学学报(医学版);2013年09期

2 谢萍;李璐;张令强;贺福初;;微管结合蛋白NuSAP的组织表达谱分析[J];军事医学科学院院刊;2010年06期

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本文编号：948233