神经干细胞移植对帕金森鼠黑质内铁和铜蓝蛋白表达水平的影响

发布时间：2017-09-30 23:22

  本文关键词：神经干细胞移植对帕金森鼠黑质内铁和铜蓝蛋白表达水平的影响

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【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病。近年来,PD发病率呈明显上升的趋势,严重影响中老年患者的晚期生活质量。目前大量的研究提示黑质内铁的沉积和铜蓝蛋白含量的下降可能是PD脑内多巴胺能神经元退行性变的关键因素,而神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)旺盛的增殖能力和多向分化细胞特性能够弥补丢失的多巴胺能神经元,进而改善PD运动障碍,成为PD细胞替代治疗的可行性方案之一。但是较少研究涉及NSCs移植后对黑质内铁的沉积和铜蓝蛋白的表达等病理微环境的影响。NSCs的增殖和神经细胞的可塑性似乎与PD疾病进程以及内环境损伤的严重性密切相关。因此,我们的研究将探讨NSCs移植到黑质靶点对PD脑内微环境尤其是铁和铜蓝蛋白代谢的改变以及对PD运动症状的影响。我们利用脑立体定位技术将活性良好的子代NSCs准确地移植到PD鼠黑质内,通过免疫组化染色计数正常对照组、PD模型组、NSCs移植组黑质内铁染色阳性细胞、铜蓝蛋白阳性细胞、酪氨酸羟化酶阳性细胞;Western blot和RT-PCR技术分别反映铜蓝蛋白和酪氨酸羟化酶蛋白翻译和基因表达水平;阿扑吗啡诱发旋转行为评价运动障碍的改变。研究结果发现,NSCs移植4周后,与对照组相比,模型组黑质内铁染色阳性细胞数明显增多,酪氨酸羟化酶和铜蓝蛋白阳性细胞数、蛋白翻译和mRNA表达水平均降低。而与模型组相比,移植组铁染色阳性细胞数减少,酪氨酸羟化酶和铜蓝蛋白阳性细胞数、蛋白翻译和mRNA表达均增高,但未达到正常水平。移植组在NSCs移植2周后,PD鼠旋转行为较移植前明显改善,而且持续到第8周,而模型组旋转变化差别无统计学意义。这些研究结果提示PD鼠黑质内NSCs移植是可行的,移植的NSCs能够分化产生多巴胺能神经元,并且通过增加铜蓝蛋白表达、减少铁的沉积发挥神经保护作用,进而改善行为学障碍。
【关键词】：帕金森病 神经干细胞 铁 铜蓝蛋白 酪氨酸羟化酶
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R742.5
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-12
• 第一章 绪论12-23
• 1.1 帕金森病概述12-13
• 1.2 铁离子13-17
• 1.3 氧化应激反应17-18
• 1.4 铜蓝蛋白18-19
• 1.5 神经干细胞19-21
• 1.6 酪氨酸羟化酶21-23
• 第二章 实验材料与方法23-34
• 2.1 实验材料23-28
• 2.1.1 实验动物和细胞23
• 2.1.2 主要药品和试剂23-27
• 2.1.3 主要仪器和耗材27-28
• 2.2 实验方法28-33
• 2.2.1 帕金森病模型建立28
• 2.2.2 旋转实验诱发28
• 2.2.3 神经干细胞取材、培养28-29
• 2.2.4 神经干细胞换液、传代29
• 2.2.5 神经干细胞移植29-30
• 2.2.6 行为学实验30
• 2.2.7 脑组织取材和切片30
• 2.2.8 铁染色30
• 2.2.9 铜蓝蛋白染色30-31
• 2.2.10 酪氨酸羟化酶染色31
• 2.2.11 镜下细胞计数31
• 2.2.12 Western blot31
• 2.2.13 Real Time  PCR31-33
• 2.3 统计学处理33-34
• 第三章 实验结果34-41
• 3.1 神经干细胞培养34-35
• 3.2 行为学测试35-36
• 3.3 铁含量36-37
• 3.4 铜蓝蛋白表达37-39
• 3.5 酪氨酸羟化酶表达39-41
• 第四章 讨论41-44
• 第五章 结论44-45
• 第六章 结束语45-46
• 6.1 主要工作与创新点45
• 6.2 后续研究工作45-46
• 参考文献46-54
• 附录54-60
• 致谢60-61
• 攻读硕士学位期间已发表或录用的论文61
• 攻读硕士学位期间正在审稿的论文61

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本文编号：951018