环孢菌素A对脑缺血再灌注后血脑屏障的影响

发布时间：2017-10-06 03:48

  本文关键词：环孢菌素A对脑缺血再灌注后血脑屏障的影响

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【摘要】：目的:通过建立小鼠脑缺血再灌注模型,腹腔注入不同剂量的环孢菌素A后,观察小鼠脑缺血再灌注后神经功能评分、梗死灶、脑组织水含量及伊文思蓝渗出量的变化情况,并用Western Blot法分析CypA、Akt、NF-κB、MMP9、Claudin-5等变化趋势,以探讨环孢菌素A(Cyclosporin A,CsA)对小鼠脑缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)后血脑屏障的影响及其机制,为更好的治疗脑缺血提供实验依据。方法:1.采用尼龙线栓法复制小鼠右侧脑局灶缺血再灌注(I/R)MCAO模型;2.将C57、apoe-/-小鼠分别等量随机分为:假手术组、脑缺血再灌注(I/R)组、溶剂(Vehicle)组、小剂量(10mg/kg)Cs A组、大剂量(20mg/kg)CsA组。分别于术后1d、3d、5d、7d不同时间点以不同的方式处死;3.术后评价小鼠脑缺血再灌注模型是否成功,并于各个时间点进行神经功能评分及转角试验;4.2%2,3,5,-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测小鼠脑梗死灶面积;5.干湿重法测定各组小鼠不同时间点脑组织水含量;6.静脉注入伊文思蓝(Evans blue,EB)后,通过检测其光密度值(OD值)及渗出情况分析血脑屏障通透性。7.Western Blot法分析CypA、Akt、NF-κB、MMP9、Claudin-5等变化趋势。结果:1.神经功能评价:假手术组小鼠在术后未出现神经功能障碍,其余各组在不同时间点均出现不同程度的神经功能障碍,与假手术组比较具有统计学差异(P0.01);大剂量CsA组与小剂量CsA组比较各时间点均具有统计学差异(P0.05)。2.梗死灶面积:与i/r组比较,小剂量csa组与大剂量csa组脑组织梗死灶面积明显减少(p0.01),vehicle组则无明显变化(p0.05);大剂量csa组梗死灶面积与小剂量csa组相比均有减少(p0.05);apoe-/-各组与c57各组梗死灶面积相比较均具有统计学差异(p0.05)。3.脑组织水含量:c57、apoe-/-小鼠各组脑水含量与其假手术组相比均明显升高,具有统计学差异(p0.01);与i/r组相比,vehicle组无明显差异(p0.05),而大剂量csa组及小剂量csa组较其明显减少(p0.05),且大剂量csa组较小剂量csa组脑组织水含量少(p0.05);apoe-/-小鼠脑组织水含量均高于与其对应的与c57小鼠组,有统计学差异(p0.05)。4.伊文思蓝:c57、apoe-/-小鼠各组伊文思蓝od值及渗出程度与其假手术组相比均明显升高,具有统计学差异(p0.01);与i/r组伊文思蓝od值及渗出程度相比,vehicle组无明显差异,无统计学差异(p0.05),而大剂量csa组及小剂量csa组较其均明显减少(p0.01),且大剂量csa组较小剂量csa组小(p0.05);apoe-/-小鼠组伊文思蓝od值及渗出程度均高于与其对应的与c57小鼠组,差异有统计学差异(p0.05)。5.相关蛋白表达:与假手术组相比较,其余各组p-akt、cyclophilina(cypa)、nk-kb、mmp-9表达均不同程度上调(p0.05),claudin-5表达水平下调(p0.05);与i/r组相比,csa干预组p-akt、cyclophilina(cypa)、nk-kb、mmp-9表达水平相对减少(p0.05),且大剂量csa组较小剂量csa组表达减弱(p0.05),而claudin-5表达水平上调(p0.05),且大剂量csa组较小剂量csa组表达上调(p0.05);vehicle组与i/r组相比无统计学差异(p0.05)。结论:1.大脑中动脉区是人脑梗塞的好发部位。本文选择的线栓法制作小鼠右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,其梗塞范围较稳定,不开颅、可准确控制缺血再灌注时间,并且其病理生理变化过程与人体相似,故该模型是研究脑缺血再灌注较为理想的动物模型。2.小鼠右侧大脑中动脉阻塞(MCAO)模型经CsA治疗后,出现神经功能缺损症状好转,梗死灶面积减小,脑水肿减轻,血脑屏障通透性减小及炎性渗出减少,可起到脑保护的作用;3.CsA可能通过抑制Akt/NF-κB途径,促进Claudin-5表达上调,保护血脑屏障(BBB)结构和功能的完整性,减轻脑水肿及渗出,从而减轻MCAO小鼠模型的继发性脑损伤。
【关键词】：脑缺血再灌注 环孢菌素A 血脑屏障
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-14
• 材料与方法14-19
• 结果19-28
• 讨论28-39
• 结论39-40
• 参考文献40-47
• 英汉缩略词对照表47-48
• 致谢48-49
• 综述49-62
• 参考文献57-62

【参考文献】

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1 孙强;韩翠红;孙学军;;缺血预适应和后适应的触发因子研究进展[J];海军医学杂志;2008年02期

2 罗海芸;李树清;;树，

本文编号：980549