MiR-124通过靶向Sp1基因抑制胶质瘤细胞迁移及侵袭的实验研究

发布时间：2017-10-07 19:16

  本文关键词：MiR-124通过靶向Sp1基因抑制胶质瘤细胞迁移及侵袭的实验研究

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【摘要】：背景及目的胶质瘤是成人中枢神经系统最常见的原发恶性肿瘤,具有很强的侵袭性及高复发率、高死亡率等特点,尽管近年来多种临床治疗方法的改进,胶质瘤病人预后和生存情况仍旧很差,对此有效的新型治疗方案的研究对临床改进非常有必要,例如胶质瘤发病的分子机制的研究。微小RNA(miRNAs),一类保守的非编码RNA,负向调控人类至少30%的基因通过转录后水平完全或者部分结合靶向mRNA的3’-UTR区域,进而降低翻译效能和影响mRNA的稳定性。最近研究表明,mi RNA作为促癌基因或者抑癌基因,参与肿瘤细胞多种生物学过程,比如细胞增殖、分化、转移、凋亡等。miRNA-124已经被证明能够抑制多种与转移相关的肿瘤,包括胶质瘤,而且文献已经证实miR-124的表达量在胶质瘤中是明显降低的。Sp1作为一个研究较透彻的转录激活因子,通过结合靶基因中富含GC的序列,该序列对下游基因的调控较为广泛,比如,和EMT相关的一个间质细胞标志物vimentin的表达,间接发挥调控肿瘤细胞的生物学作用。先前研究已经指出,Sp1可以联合其他复合物共同激活vimentin的启动子以促进其表达,而且越来越多的研究表明Sp1通过调控涉及肿瘤转移的基因进而影响多种类型肿瘤的转移。对胶质瘤而言,先前的研究已经表明Sp1在胶质瘤中高表达,并且可以作为一项判断胶质瘤病人预后的指标。考虑到miR-124和Sp1均与转移性肿瘤相关加上胶质瘤浸润特性,结合生物预测软件,我们猜测miRNA-124可能通过靶向Sp1来调控胶质瘤的迁移和侵袭。研究方法1、首先选取U87、U251、A172、OLN93四株细胞利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及western blot方法检测四株细胞中的mirR-124和Sp1本底表达量;2、选用人脑胶质瘤细胞株U87、A172作为研究对象,(1)两珠细胞过表达miR-124,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)来检测miR-124表达量以及相对应的Sp1 mRNA表达量,western blot实验检测过表达miR-124后Sp1和vimentin表达量,荧光素酶报告实验进一步证明miR-124靶向结合Sp1,transwell实验用来证明miR-124的生物学作用;(2)基因敲除方法靶向敲除Sp1基因,分别利用western blot检测Sp1和vimentin的表达,transwell实验进一步来确定Sp1的生物学作用。结果qRT-PCR结果显示:和正常胶质细胞OLN93相比,miR-124的表达量在胶质瘤细胞U87,U251,A172细胞中明显下调;胶质瘤细胞中Sp1在mRNA和蛋白质层面上的表达量均高于正常胶质细胞;U87和A172过表达miR-124后,Sp1和vimentin的表达均下降,同时抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,双荧光素酶实验也验证了miR-124靶向结合Sp1的3‘-UTR区。敲除Sp1基因后,western blot实验结果提示Sp1和vimentin的表达量下降,同时胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力也是下降的。结论(1)mi R-124在胶质瘤细胞中低表达,Sp1呈高表达;(2)miR-124能够抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭;(3)胶质瘤细胞中,miR-124靶向作用于Sp1基因;(4)靶向敲除Sp1基因抑制胶质瘤细胞的迁移,侵袭和vimentin的表达。
【关键词】：MiR-124 胶质瘤 Sp1 迁移 侵袭
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-15
• 参考文献12-15
• 材料与方法15-23
• 实验结果23-27
• 讨论27-29
• 结论29-30
• 参考文献30-32
• 综述32-41
• 参考文献38-41
• 中英文对照41-42
• 攻读硕士学位期间参与的论文42-43
• 致谢43-44

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本文编号：989594