脑缺血再灌诱导的TIGAR对星形胶质细胞的作用及其机制研究

发布时间：2017-10-08 12:33

  本文关键词：脑缺血再灌诱导的TIGAR对星形胶质细胞的作用及其机制研究

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【摘要】：目的:观察小鼠短暂局灶性脑缺血时TIGAR对于星形胶质细胞的保护作用。研究在缺血再灌损伤后的星形胶质细胞内TIGAR与NF-κB的作用机制以及其对炎症反应的影响。方法:采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transient middle cerebral occlusion/reperfusion,MCAO/R)模型和体外培养的原代星形胶质细胞缺糖缺氧/复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)模型。在小鼠缺血侧脑组织中使用免疫荧光法,在培养的星胶细胞OGD/R模型中用Western blot检测缺血再灌后星形胶质细胞内TIGAR蛋白含量的变化。用构建的过表达TIGAR和沉默TIGAR的腺病毒感染原代星形胶质细胞,使用CCK-8和LDH试剂盒检测TIGAR对OGD再灌损伤的星形胶质细胞的保护作用。运用NADPH/NADP+和GSH/GSSG试剂盒检测过表达或沉默TIGAR后的缺血再灌后脑皮层和OGD/R处理后的星形胶质细胞内NADPH和GSH水平变化,用DHE染色法检测星形胶质细胞内的ROS变化。同时用Western blot和elisa检测OGD/R 24h后星形胶质细胞内IL-1β,TNF-α以及iNOS和COX-2的含量变化,在缺血再灌脑组织中使用免疫荧光法,对GFAP与IL-1β和COX-2进行共定位。在培养的星形胶质细胞内,过表达或沉默TIGAR后,用Western blot检测缺血再灌后,IκBα和p-IκBα变化的差异性,用核质分离和Western blot检测细胞核内NF-κB水平的变化。结果:脑缺血再灌后TIGAR在星形胶质细胞内的表达增加。用构建的过表达或干扰TIGAR的腺病毒侵染原代星形胶质细胞能有效地增加或降低TIGAR的表达。在星形胶质细胞OGD/R模型中,过表达TIAGR能显著地减少OGD/R诱导的星形胶质细胞的死亡;干扰TIGAR加重OGD/R诱导的星形胶质细胞损伤。在缺血再灌的体内外模型中,过表达TIGAR显著地抑制OGD/R诱导的细胞内NADPH,GSH水平的降低以及ROS水平的增强;干扰TIGAR则促进细胞内NADPH,GSH水平的降低以及ROS水平的增强。在动物及细胞模型中,过表达TIGAR降低缺血再灌诱导的IL-1β,TNF-α以及iNOS和COX-2的水平;干扰TIGAR增强其诱导的IL-1β,TNF-α以及iNOS和COX-2的水平。在原代星形胶质细胞OGD再灌注的早期,过表达TIGAR降低OGD/R诱导的p-IκB的活化和NF-κB的入核;干扰TIGAR增强OGD/R诱导的p-IκB的活化。结论:小鼠脑缺血再灌注后TIGAR对星形胶质细胞发挥保护作用,其作用机制可能与增强内源性抗氧化剂NADPH抑制ROS,抑制NF-κB通路的激活,减轻炎症反应有关。
【关键词】：脑缺血再灌 TIGAR 炎症 NF-κB
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R743.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 一、本课题研究的理论基础及国内外现状9-11
• 1、研究抗缺血性脑中风的重要性9
• 2、脑缺血再灌注损伤的病理生理机制9
• 3、星形胶质细胞在脑缺血损伤中的作用9-10
• 4、NF-κB作为脑缺血治疗的新靶点10
• 5、TIGAR的研究现状10-11
• 二、本课题的研究内容11
• 三、本课题的创新点11
• 四、本课题的研究意义与价值11-12
• 第一部分 TIGAR对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中星形胶质细胞的保护作用12-24
• 第一节 TIGAR在脑缺血再灌注后在星形胶质细胞内激活12-19
• 材料和方法12-16
• 结果16-18
• 附图18-19
• 小结19
• 第二节 TIGAR对小鼠皮层星形胶质细胞OGD诱导的细胞损伤的保护作用19-24
• 材料和方法19-20
• 结果20-22
• 附图22-23
• 小结23-24
• 第二部分 TIGAR保护脑缺血再灌注损伤的分子机制24-38
• 第一节 TIGAR与PPP代谢途径相关24-28
• 材料和方法24-25
• 结果25-27
• 附图27-28
• 小结28
• 第二节 TIGAR对小鼠脑缺血再灌注损伤所致炎症反应的影响28-32
• 材料和方法28-29
• 结果29-31
• 附图31-32
• 小结32
• 第三节 TIGAR对于星形胶质细胞的OGD复灌损伤的保护作用与NF-ΚB信号通路的关系32-38
• 材料和方法32-33
• 结果33-35
• 附图35-37
• 小结37-38
• 讨论38-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 综述45-49
• 参考文献47-49
• 攻读学位期间公开发表的论文49-50
• 致谢50-51

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