可注射性葡聚糖—明胶支架与生物因子复合的研究

发布时间：2017-10-15 05:19

  本文关键词：可注射性葡聚糖—明胶支架与生物因子复合的研究

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【摘要】：第一部分：可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架的实验研究 目的:检测可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架与传代分离获取的滑膜间充质干细胞的相容性。 方法：消化滑膜组织,传代分离以获取滑膜间充质干细胞,通过氧化葡聚糖,氨基化明胶,配制不同比例的葡聚糖-明胶复合支架,并检测支架的相关参数：凝胶时间、流变性能、溶胀性能及降解性能；接种滑膜间充质干细胞于葡聚糖-明胶复合支架上,于第3d和7d进行WST-1分析。 结果：传代分离获取的滑膜间充质干细胞呈梭型；葡聚糖-明胶复合支架孔壁薄,孔径范围为50-200u m,且相邻孔隙间贯通率高；当葡聚糖与明胶比为5：5时,水凝胶成胶最快；流变仪检测在95s时葡聚糖-明胶体系储能模量和损耗模量相等,体系出现凝胶点,发生从液态向固态的转变,表明可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架可通过注射快速成胶；SMSCs在普通细胞培养组(对照组)、7：3、6：4、5：5、4：6和3：7配比的可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架组均可良好生长,WST-1检测发现SMSCs在可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架上随明胶含量及培养时间的增加增殖更好,差异有显著性,P0.05。 结论：可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架生物相容性良好,是软骨组织工程中一种良好的材料支架。 第二部分：滑膜间充质干细胞在五种不同趋化因素作用下迁移的实验研究 目的：观察血清、TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic对兔滑膜间充质干细胞迁移能力的影响。 方法：选取含浓度分别是0.1%,0.5%,1.0%,2.00%,5.0%,10.0%,20.0%的血清以及含浓度是50ng/ml的TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic的低糖DMEM作用于兔滑膜间充质干细胞,通过Transwell小室检测其迁移能力。 结果：血清、TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic均可趋化兔滑膜间充质干细胞迁移,血清浓度为5.0%时趋化迁移作用较其他浓度组明显,四种生物因子中PDGF-AB的趋化迁移作用较TGF-β3、BMP-2、FGF-basic明显。 结论：兔滑膜间充质干细胞可在TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic作用下趋化迁移,其中PDGF-AB的趋化作用最明显,可用于促进滑膜间充质干细胞迁移归巢,进行软骨原位再生的修复研究。 第三部分葡聚糖-明胶支架复合生物因子成软骨的实验研究 目的：研究和比较SMSCs与复合TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic的葡聚糖-明胶支架在裸鼠体内的成软骨能力。 方法：采用3只裸鼠6周龄,每只裸鼠皮下注射分五组：TGF-β3组：TGF-β3复合SMSCs/葡聚糖-明胶支架；PDGF-AB组：PDGF-AB复合SMSCs/葡聚糖-明胶支架：BMP-2组：BMP-2复合SMSCs/葡聚糖-明胶支架：FGF-basic组：FGF-basic复合SMSCs/葡聚糖-明胶支架；对照组：SMSCs/葡聚糖-明胶支架。术后8周处死裸鼠,取出皮下支架组织标本,分别作HE染色、甲苯胺蓝染色,组织学观察成软骨的情况。 结果：新生软骨大体标本呈乳白色类似天然软骨,无红色浸润,质地较强有弹性；HE染色和甲苯胺蓝染色显示TGF-β3组、BMP-2组、FGF-basic组细胞分布均匀,大量软骨样细胞外基质形成,对照组和PDGF-AB组则均呈阴性。 结论：葡聚糖-明胶支架注射入裸鼠体内后呈现了良好的生物相容性；生物因子TGF-β3、BMP-2、FGF-basic比PDGF-AB更能促进体内软骨再生；PDGF-AB和无生物因子在体内成软骨能力上无明显差异。
【关键词】：滑膜间充质干细胞 葡聚糖-明胶复合支架 细胞/支架相容性 组织工程 滑膜间充质干细胞 生物因子 趋化 迁移 滑膜间充质干细胞 生物因子 成软骨
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08;R687
【目录】：

• 目录3-5
• 英文缩略语5-6
• 中文摘要6-9
• Abstract9-12
• 前言12-15
• 第一部分：可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架的实验研究15-33
• 第一篇：滑膜间充质干细胞的获取和培养15-20
• 摘要15
• 1 实验试剂与仪器15-16
• 2 实验方法16-18
• 3 结果18-19
• 4 讨论19-20
• 5 小结20
• 第二篇：可注射性新型葡聚糖-明胶复合支架的构建及其理化特性的实验研究20-27
• 摘要20-21
• 1 实验材料与试剂21
• 2 实验方法21-23
• 3 实验结果23-26
• 4 讨论26-27
• 5 小结27
• 第三篇：滑膜间充质干细胞在可注射性新型葡聚糖.明胶复合支架上体外共培养及其生物学活性的研究27-33
• 摘要28
• 1 实验材料与试剂28-29
• 2 实验方法29-30
• 3 结果30-32
• 4 讨论32
• 5 小结32-33
• 第二部分：滑膜间充质干细胞在五种不同趋化因素作用下迁移的实验研究33-42
• 第四篇：血清对滑膜间充质干细胞体外迁移能力的实验研究33-37
• 摘要33
• 1 实验材料与试剂33-34
• 2 实验方法34-35
• 3 结果35-36
• 4 讨论36-37
• 5 小结37
• 第五篇：不同生物因子对滑膜间充质干细胞体外迁移能力的实验研究37-42
• 摘要37
• 1 实验材料与试剂37-38
• 2 实验方法38-39
• 3 结果39-40
• 4 讨论40-41
• 5 小结41-42
• 第三部分：葡聚糖-明胶支架复合生物因子成软骨的实验研究42-48
• 第六篇：葡聚糖-明胶支架复合生物因子成软骨的实验研究42-48
• 摘要42
• 1 实验材料与试剂42-43
• 2 实验方法43-45
• 3 结果45-47
• 4 讨论47
• 5 小结47-48
• 参考文献48-53
• 全文总结53-54
• 附录一 综述54-66
• 参考文献60-66
• 致谢66-67
• 研究生阶段发表的文章67-68

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 潘建锋;郭常安;阎作勤;;关节软骨原位再生研究进展[J];国际骨科学杂志;2012年01期

2 莫湘涛;邓力;李秀群;解慧琪;罗静聪;郭尚春;杨志明;;软骨细胞-海藻酸钠水凝胶-SIS复合体修复全层关节软骨缺损的实验研究[J];中国修复重建外科杂志;2009年08期

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本文编号：1035291