脂肪乳对中心静脉导管表面混合生物膜形成的影响

发布时间：2017-10-18 13:28

  本文关键词：脂肪乳对中心静脉导管表面混合生物膜形成的影响

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【摘要】：[目的]：探索脂肪乳对中心静脉导管表面大肠杆菌-白色念珠菌混合生物膜(Mixed-Species Biofilm,MSB F)形成的影响。[方法]：1.构建中心静脉导管表面白色念珠菌-大肠杆菌混合生物膜体外膜型：通过XTT、结晶紫、激光共聚焦显微镜、扫描电镜技术动态监测生物膜的形成过程；2.在1%、5%、10%、15%、20%脂肪乳浓度下对白色念珠菌-大肠杆菌混合生物膜进行培养,使用XTT测定病原菌生长动力；结晶紫半定量测定生物膜形成厚度；活死菌染色后采用CLSM观察生物膜内活、死菌分布情况；荧光原位杂交技术观察生物膜内部两种病原菌的分布、结构；扫描电镜观察生物膜表面病原菌的分布、结构。3.采用qRT-PCR方法检测10%脂肪乳浓度对混合生物膜中大肠杆菌基因(flhDC、iha)白色念珠菌基因(HTA1、hwp1)的表达情况的影响。[结果]：1、XTT、结晶紫检测发现阳性混合组生物膜生长动力及形成能力高于阴性混合组,均高于单菌种组。2、扫描电镜结果显示,随着培养时间增加,PVC材料表面生物结构越加复杂,混合培养组表面形成团块状、层叠状混合生物膜,可见大肠杆菌和白色念珠菌的孢子、菌丝呈重叠、混杂生长,白色念珠菌周围(孢子、假菌丝、菌丝)粘附大量大肠杆菌,形成复杂网状结构。与阴性混合组相比,阳性混合组生物膜结构更为复杂,病原菌相互关系更加密切。3、脂肪乳组混合生物膜生长动力及生物膜形成能力均高于对照组,10%脂肪乳浓度下混合生物膜形成情况最佳。脂肪乳浓度在5%及以上组扫描电镜检查发现,PVC材料表面,Ca孢子、假菌丝、菌丝、E.coil及脂肪乳成分相互重叠形成结构致密的生物膜。荧光原位杂交后行CLSM观察发现,生物膜内部两种病原菌也是相互重叠,混杂生长。4、培养24h生物膜荧光定量PCR结果：与对照组相比,脂肪乳组flhDC、iha、HTA1、hwp1基因明显上调,分别为6.0567倍、22.1474倍、2.3914倍、1.7218倍。培养72h生物膜荧光定量PCR结果：与对照组相比,脂肪乳组flhDC、 iha、HTA1、hwp1基因均下调,分别为0.0633倍、0.0813倍、0.7911倍、0.0706倍。[结论]：1、大肠杆菌MC1000和白色念珠菌ATCC10231在菌液浓度为1×106CFU/mL共培养24h能在PVC材料表面形成E.Coil-Ca复杂混合生物膜。2、大肠杆菌粘附于白色念珠菌假菌丝、菌丝孢子表面,相互交叉、重叠形成结构复杂的E.Coil-Ca混合生物膜,其生物膜较单菌株生物膜结构复杂,厚度增加。3、脂肪乳可以促进E.coil-Ca混合生物膜形成,10%脂肪乳浓度效果最佳。脂肪乳成分同时也参与细菌生物膜的组成,使E.coil-Ca混合生物膜结构更加复杂,生物膜内部大肠杆菌粘附于白色念珠菌假菌丝、菌丝孢子表面,相互交叉、重叠混合生长。4、脂肪乳早期可能通过上调大肠杆菌flhDC、iha,白色念珠菌HTA1、hwp1表达而促进E.coil-Ca混合生物膜的形成。
【关键词】：中心静脉导管相关性感染 脂肪乳注射液 混合生物膜 荧光原位杂交技术 生物膜形成相关基因
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.5;R318.08
【目录】：

• 主要中英文缩略词表6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 引言12-14
• 第一部分：构建大肠杆菌-白色念珠苗体外生物膜模型14-35
• 材料与方法14-32
• 一、实验材料14-16
• 二、实验方法16-19
• 三、实验结果19-32
• 讨论32-34
• 结论34-35
• 第二部分：不同浓度脂肪乳对E. coi l-Ca生物膜形成的影响35-67
• —、实验材料35-37
• 二、实验方法37-44
• 三、统计学处理44-45
• 四、实验结果45-64
• 讨论64-67
• 结论67
• 本课题研究的创新性67
• 本课题进一步的研究问题67-68
• 参考文献68-72
• 文献综述72-82
• 参考文献77-82
• 在读期间参与科研项目情况82
• 在读期间发表文章情况82-83
• 致谢83

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本文编号：1055182