壳聚糖—阿仑膦酸钠复合材料对大鼠成骨细胞增殖和分化影响的实验研究

发布时间：2017-10-21 06:38

  本文关键词：壳聚糖—阿仑膦酸钠复合材料对大鼠成骨细胞增殖和分化影响的实验研究

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【摘要】：【目的】体外分离培养新生SD大鼠颅盖骨的成骨细胞，并对其进行形态学、生物学鉴定。构建阿仑膦酸钠(ALN)与壳聚糖(Cs)物质的量之比分别为1:5、1:10、1:20的三种壳聚糖-阿仑膦酸钠(Cs/ALN)复合材料，观察其生物相容性，并初步研究三种Cs/ALN复合材料对成骨细胞增殖与分化的影响。 【方法】用酶消化法分离培养新生SD大鼠颅盖骨的成骨细胞，并进行体外传代培养。倒置相差显微镜及HE染色法观察成骨细胞的形态；利用MTT比色试验绘制P3、P4代成骨细胞的增殖曲线；碱性磷酸酶(ALP)染色法检测成骨细胞内ALP的含量；茜素红染色法及Von kossa染色法观察成骨细胞于体外培养时形成的矿化结节。制备ALN与Cs物质的量之比分别为1:5、1:10、1:20的三种Cs/ALN复合材料，，同时制备不含ALN的Cs支架材料。将P3代SD大鼠成骨细胞与上述4种材料复合培养一段时间后，扫描电镜观察细胞在材料表面的黏附及生长情况；MTT比色试验评价材料对成骨细胞增殖的影响；Transwell法观察材料对细胞的趋化作用；流式细胞术检测材料对细胞生长周期的影响；酶标仪法、ELISA法分别检测细胞培养上清液中ALP及骨钙素(BGP)的含量，以初步了解材料对细胞分化的影响。 【结果】本实验采用酶消化法成功分离并培养出纯度较高的SD大鼠成骨细胞；MTT比色试验显示细胞增殖能力强，扩增迅速；ALP染色可观察到成骨细胞内含有大量的ALP颗粒，说明细胞的分泌功能强；培养2周后，茜素红染色法及Von kossa染色法可观察到大量钙化结节的形成。将细胞与四种支架材料复合培养一段时间后，扫描电镜观察及MTT比色试验均证实四种材料都具有良好的生物相容性；MTT比色试验及流式细胞术细胞周期检测结果显示物质的量之比ALN: Cs=1:10的Cs/ALN复合材料对成骨细胞增殖的促进作用最强；细胞培养上清液ALP及BGP含的测定显示物质的量之比ALN: Cs=1:10的Cs/ALN复合材料对成骨细胞分化的促进作用亦最强；ALN: Cs为1:5和1:20的两种Cs/ALN复合材料对成骨细胞的增殖和分化也有一定的促进作用；而Cs支架材料则对成骨细胞的增殖和分化无明显的促进作用；Transwell试验结果显示，ALN: Cs=1:5的Cs/ALN复合材料对成骨细胞的趋化作用最强。 【结论】本实验成功从新出生的SD大鼠颅盖骨中分离出成骨细胞，经反复贴壁法纯化后细胞纯度较高，且体外培养时扩增迅速，形态学及生物学特性稳定。Cs/ALN复合材料是一种具有良好生物相容性的新型复合生物支架材料，除了具备传统的骨组织工程支架材料的特性外，物质的量之比ALN: Cs=1:10的Cs/ALN复合材料具有明显促进成骨细胞增殖、分化及一定的趋化的作用，为将药物负载在组织工程生物支架材料中，以达到大幅度提高体内成骨效率、修复骨缺损的目的提供了初步的理论依据。
【关键词】：SD大鼠 成骨细胞 壳聚糖 阿仑膦酸钠 复合材料 骨组织工程
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 1 引言8-24
• 1.1 种子细胞9-15
• 1.2 骨组织工程生物活性支架材料的研究进展15-22
• 1.3 阿仑膦酸钠(Alendronate, ALN)的研究进展22-24
• 2 实验一 SD 大鼠成骨细胞的分离、培养及鉴定24-43
• 2.1 前言24
• 2.2 材料与方法24-31
• 2.3 结果31-32
• 2.4 讨论32-35
• 2.5 结论35-36
• 2.6 附图36-43
• 3 实验二 壳聚糖-阿仑膦酸钠复合材料对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响43-68
• 3.1 前言43
• 3.2 材料与方法43-52
• 3.3 结果52-56
• 3.4 讨论56-59
• 3.5 结论59-61
• 3.6 附图61-68
• 4 全文结论68-69
• 5 不足与展望69-70
• 6 参考文献70-77
• 7 英文缩略词表77-79
• 8 在学期间发表论文及科研成果79-80
• 9 致谢80

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 屠美,崔莹,周长忍,邹翰;肝素化壳聚糖季铵盐/壳聚糖复合膜抗凝血性能的研究[J];功能高分子学报;1997年03期

2 王剑宁,曾融生,杨小平,杨国平;胰岛素样生长因子Ⅱ对体外培养成骨细胞辐射效应的影响[J];口腔医学研究;2003年05期

3 王艳,周培根,俞剑

本文编号：1071848