PLGA-HA-PVA材料复合hBMSCs向软骨分化的体外实验研究

发布时间：2017-10-23 09:19

  本文关键词：PLGA-HA-PVA材料复合hBMSCs向软骨分化的体外实验研究

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【摘要】：目的：探索hBMSCs接种于不同配比PLGA-HA-PVA复合三维支架材料上干细胞的分化情况。 方法：制备PVA质量分数分别为15wt%、10wt%、5wt%PLGA-HA-PVA复合三维支架材料,其中PLGA为30wt%, HA为5wt%。支架上接种密度为1x106/mlhBMSCs的第3代传代细胞。将上述材料分为诱导组及非诱导组(n=5),根据分组分别加上hBMSCs软骨诱导培养液或普通hBMSCs培养液,并给每组设立空白对照组(含干细胞及培养液)。每3d换液一次,观察支架周围细胞生长情况,回收培养后7d、14d、21d时培养液行ELISA定量检测II型胶原及糖胺聚糖,培养21d后取复合材料行HE染色、免疫组化定性检测II型胶原。采用SPSS19.0统计软件对结果进行统计分析。 结果：hBMSCs生长状况良好,细胞贴壁,纺锤形或多角。在培养后21天复合物HE染色示诱导组有细胞外基质的分泌,II型胶原免疫组化结果显示诱导组存在棕黄色颗粒；非诱导组HE染色未见明显细胞外基质分泌,免疫组化示无明显棕黄色颗粒,表示诱导组有II型胶原表达。诱导组培养液中II型胶原及糖胺聚糖的含量在PVA浓度为15wt%最高,PVA浓度为10wt%次之,PVA浓度为5wt%及空白对照组最低,差异具有统计学差异(P0.05)。非诱导组及非诱导空白对照组培养液中未测及II型胶原及糖胺聚糖成分。 结论：PVA浓度为15wt%或10wt%的PLGA-PVA-HA三维复合支架在软骨细胞诱导液的作用下能促进]BMSCs分化为软骨细胞。且以PVA浓度为15wt%促进能力更强。
【关键词】：软骨损伤 组织工程 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 聚乙烯醇 羟基磷灰石 成人骨髓间充质干细胞
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R683;R318.08
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-10
• 符号说明10-11
• 1 前言11-13
• 2 资料与方法13-19
• 2.1 实验材料与细胞13
• 2.2 主要仪器与设备13
• 2.3 主要试剂13-14
• 2.4 实验方法14-18
• 2.4.1 实验分组14
• 2.4.2 实验流程14
• 2.4.3 PLGA-HA-PVA复合支架材料的制备14-15
• 2.4.4 hBMSCs的扩增15
• 2.4.5 hBMSCs与支架材料的复合培养15-16
• 2.4.6 支架细胞复合体HE染色16
• 2.4.7 支架细胞复合体免疫组化染色16-17
• 2.4.8 细胞培养液ELISA检测Ⅱ型胶原及糖胺聚糖17-18
• 2.5 统计学方法18-19
• 3 结果19-21
• 3.1 支架周围细胞生长情况19
• 3.2 支架细胞复合物HE染色及Ⅱ型胶原免疫组化结果19
• 3.3 支架细胞复合物培养过程中培养液Ⅱ型胶原及糖胺聚糖的含量19-21
• 3.3.1 诱导组培养液Ⅱ型胶原及糖胺聚糖表达19-20
• 3.3.2 非诱导组培养液Ⅱ型胶原及糖胺聚糖表达20-21
• 4 附图21-25
• 5 统计图25-26
• 6 讨论26-29
• 7 结论29-30
• 参考文献30-33
• 综述33-51
• 1. 关节软骨的结构与功能33-34
• 2. 软骨细胞微环境34
• 3. 关节软骨损伤34-35
• 4. 关节软骨损伤后的修复35-36
• 5. 关节软骨损伤后的治疗36-37
• 6. 软骨组织工程37-45
• 6.1 细胞类型37-40
• 6.1.1 软骨细胞37-38
• 6.1.2 多能干细胞38-40
• 6.2 支架类型40-42
• 6.2.1 蛋白质类材料40-41
• 6.2.2 碳水化合物类材料41
• 6.2.3 人工合成类材料41-42
• 6.3 生长因子42-45
• 6.3.1 转化生长因子-β(TGF-β)超家族43
• 6.3.2 纤维母细胞生长因子(FGF)家族43
• 6.3.3 胰岛素样生长因子(IGF)43-44
• 6.3.4 血小板来源生长因子44-45
• 参考文献45-51
• 攻读学位期间主要的研究成果51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 马骁;杨学军;;转化生长因子在软骨修复方面的应用进展[J];解放军医药杂志;2011年02期

2 李海东;肖静;程凤梅;陈湘雄;;PVA/HA复合水凝胶的制备及性能研究[J];长春工业大学学报(自然科学版);2007年03期

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本文编号：1082622