用组织工程学方法探讨兔佐剂性关节炎关节软骨修复的实验病理学研究

发布时间：2017-10-28 16:28

  本文关键词：用组织工程学方法探讨兔佐剂性关节炎关节软骨修复的实验病理学研究

  更多相关文章： 组织工程 佐剂性关节炎 软骨修复 软骨细胞 海藻酸钙支架

【摘要】：目的 通过研究利用组织工程学方法分离骨髓间充质干细胞并将其在体外纯化培养、诱导成软骨细胞，将软骨细胞与海藻酸钙支架混合后，注入关节腔治疗兔佐剂性关节炎造成的关节软骨缺损，观察治疗后的效果，进而探讨体外培养的自体软骨细胞在注入关节腔后对软骨修复的作用，为临床上利用组织工程学方法治疗类风湿性关节炎提供相应的理论基础和实验依据。 方法 ⑴取实验用新西兰长耳白兔随机分为3组：假手术对照组8只，关节炎模型组8只，软骨细胞-海藻酸钙支架复合物治疗组8只。 ⑵对关节炎模型组和软骨细胞-海藻酸钙支架复合物治疗组兔双膝关节处注射佐剂诱导关节炎，对假手术对照组兔膝关节注射生理盐水。 ⑶抽取治疗组动物骨髓，将所抽骨髓利用分离液离心法分离出骨髓间充质干细胞，体外培养纯化，并使其向软骨方向诱导。 ⑷将所得软骨细胞与海藻酸钙支架混合，电镜观察软骨细胞在支架内的生长情况，并将支架复合物注回治疗组关节腔内，治疗时间为一个月。假手术组及模型组兔膝关节则注入生理盐水用于对照。 ⑸取三组兔子的膝关节，，进行大体观察，检测软骨细胞-海藻酸钙支架复合物治疗组的疗效，进行组织学评分，并通过HE染色和免疫组织化学检验软骨细胞在体内的修复作用。 结果 ⑴注射佐剂的实验用兔均出现关节红肿变形，显示造模成功。 ⑵体外培养的间充质干细胞在加入诱导剂后出现了细胞形态的改变，阿利新蓝染色及II型胶原免疫组化结果显示诱导后形成的细胞为软骨细胞。 ⑶病理学分析显示治疗组的软骨缺损比未治疗组的有明显修复性改善。 结论 本实验通过对软骨细胞-海藻酸钙支架复合物治疗后关节软骨缺损处的病理学分析，证实在对兔佐剂性关节炎的软骨缺损治疗中，利用组织工程学方法治疗是一种有效的治疗方法。
【关键词】：组织工程 佐剂性关节炎 软骨修复 软骨细胞 海藻酸钙支架
【学位授予单位】：宁波大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 目录8-10
• 引言10-14
• 1 材料与试剂配制14-19
• 1.1 实验材料14-16
• 1.1.1 实验动物14
• 1.1.2 实验试剂14-15
• 1.1.3 常用耗材及器具15
• 1.1.4 实验仪器15-16
• 1.2 试剂配制方法16-19
• 1.2.1 磷酸盐缓冲液（PBS）的配制16
• 1.2.2 NaCl 溶液的配制16
• 1.2.3 CaCl2溶液的配制16
• 1.2.4 D-Hanks 溶液的配制16
• 1.2.5 0.25%胰酶溶液的配制16-17
• 1.2.6 Percoll（1.073 g/ml）细胞分离液的配制17
• 1.2.7 麻醉剂的配制17
• 1.2.8 固定液的配制17
• 1.2.9 脱钙液的配制17
• 1.2.10 海藻酸盐悬液的配制17-18
• 1.2.11 细胞培养基的配制18
• 1.2.12 75%乙醇18-19
• 2 实验方法19-26
• 2.1 实验技术路线图19
• 2.2 制备动物模型及提取种子细胞19-20
• 2.3 种子细胞的分离纯化20
• 2.4 种子细胞的体外培养20-21
• 2.5 种子细胞的诱导分化21
• 2.6 细胞诱导后的鉴定21-22
• 2.7 软骨细胞与海藻酸钙支架的复合22
• 2.8 软骨细胞-海藻酸钙支架扫描电镜观察22-23
• 2.9 软骨细胞-海藻酸钙支架混合物回注23
• 2.10 获取实验动物膝关节23
• 2.11 实验动物膝关节的观察及关节软骨组织学评分23-24
• 2.12 制作膝关节石蜡切片24-25
• 2.13 膝关节石蜡切片的 HE 染色25
• 2.14 膝关节切片的 II 型胶原免疫组化检验25
• 2.15 统计分析25-26
• 3 实验结果26-35
• 3.1 动物模型制备结果26
• 3.2 膝关节大体观察结果26-28
• 3.3 骨髓间充质干细胞诱导分化成软骨种子细胞28-29
• 3.4 兔膝关节处 HE 染色结果29-30
• 3.5 兔膝关节处免疫组化染色结果30-32
• 3.6 藻酸钙支架制备及观察32-33
• 3.7 膝关节软骨组织学评分33-35
• 4 讨论35-38
• 5 结论38-39
• 参考文献39-44
• 附录A 常用缩略词44-45
• 附录B 综述45-55
• 参考文献53-55
• 在校研究成果55-56
• 致谢56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 张颖;王富友;谭洪波;杨柳;;微骨折技术修复羊膝关节软骨缺损组织学观察[J];重庆医学;2010年19期

2 赵名艳;李立华;周长忍;鲁路;;可注射海藻酸钙水凝胶的制备研究[J];功能材料;2010年08期

3 张鹏;戴\戎;;关节软骨修复中的相关因子[J];国际骨科学杂志;2008年04期

4 申财芳;林月秋;谭洪波;;关节软骨修复材料研究进展[J];西南军医;2011年02期

5 任利玲;冯雪;马东洋;王建卫;陈富林;丁寅;;海藻酸盐小球中培养的软骨细胞的生长[J];西安交通大学学报(医学版);2011年01期

6 初殿伟;王玮;陈立军;王文良;张华亮;杨亮;李建鑫;;兔骨髓间充质干细胞/壳聚糖-胶原支架复合体构建软骨组织工程支架[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年42期

7 张清林;吕惠成;吴一民;;转化生长因子β1联合骨形态发生蛋白2诱导骨髓间充质干细胞体外向软骨细胞的分化[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年24期

8 朱振宗;梁伟国;沈雁;杨小红;戴丽冰;谭见容;梁佩红;张金丽;康宁;;海藻酸钠复合载体长期培养软骨细胞的生物学稳定性[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年16期

9 张伊;韦登明;尹向旭;贾学敏;;关节软骨缺损的组织工程修复[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年33期

10 陈东旭;薄占东;张翼;;间充质干细胞治疗类风湿性关节炎的研究与应用[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年49期

本文编号：1109063