富血小板纤维蛋白构建组织工程骨的研究

发布时间：2017-10-31 12:18

  本文关键词：富血小板纤维蛋白构建组织工程骨的研究

  更多相关文章： 组织工程 富血小板纤维蛋白 比格犬 乳牙牙髓细胞 骨髓间充质干细胞 牙槽骨缺失

【摘要】：目的: （1）探究从比格犬获得的富血小板纤维蛋白（Platelet-rich fibrin,PRF）的结构特征； （2）验证富血小板纤维蛋白作为组织工程支架材料的可能性； （3）评价富血小板纤维蛋白复合骨髓间充质干细胞构建组织工程骨修复牙槽骨缺损的效果； （4）筛选经富血小板纤维蛋白体外作用后更适合早期成骨的组织工程骨种子细胞。 方法： （1）从比格犬颈外静脉快速抽取20ml血液，3000rpm离心后获得富血小板纤维蛋白并采用扫描电镜和HE染色观察其结构。 （2）从比格犬髂前上棘处抽取5ml骨髓进行培养获的骨髓间充质干细胞复合，将其与富血小板纤维蛋白复合后测定骨髓间充质干细胞的增殖能力以及早期成骨能力。 （3）9只比格犬的双侧侧切牙拔除后构建颊侧骨壁缺损的拔牙位点模型并随机分组：实验组A：血凝块组（n=6）；实验组B：单独的PRF组（n=6）；实验组C：组织工程骨组（PRF复合骨髓间充质细胞）（n=6）。所有比格犬手术后均无异常。术后即刻、六周以及十二周通过锥形束CT观察成骨的高度和骨密度。 （4）采用改良组织块法体外培养比格犬乳牙牙髓细胞和恒牙牙髓细胞，并进行多向分化的鉴定。将富血小板纤维蛋白（PRF）作用于乳牙牙髓细胞、恒牙牙髓细胞，1、4、7、11天时测定细胞的增殖能力、碱性磷酸酶半定量、实时定量PCR检测相关成骨基因，21天评价钙结节数量。 结果： （1）从比格犬获取富血小板纤维蛋白较容易，其在镜下表现为多孔的网状支架结构并包含大量的白细胞。 （2）富血小板纤维蛋白体外作用于骨髓间充质干细胞可以促进其增殖和早期成骨。 （3）比格犬颊侧牙槽骨壁缺损的骨修复实验中，在术后即刻、六周和十二周进行锥形术CT观察评价骨高度和骨密度，PRF和骨髓间充质干细胞构建的组织工程骨组成骨最为显著，六周时就有显著差异，缺损的颊侧牙槽骨壁几乎完全修复。骨高度（2.63±0.57）和骨密度（765.19±59.70）相较血凝块组（5.65±2.91、599.08±53.88）和PRF组（4.14±1.16、644.76±65.39）具有显著增高（p0.05）。 （4）乳牙牙髓细胞和恒牙牙髓细胞生长旺盛，多向分化鉴定验证了两种细胞具有成骨、成脂以及成软骨的能力。PRF体外作用于乳牙牙髓细胞、恒牙牙髓细胞都可以促进它们的增殖、钙化和成骨分化，较不加入PRF的组都有显著差异（P0.05）。实时定量PCR检测相关成骨基因在PRF的作用下较早期就有表达，且差异显著（P0.05）。在牙髓细胞中，乳牙牙髓细胞较恒牙牙髓细胞对PRF的作用更敏感，自我矿化的能力更强。 结论: （1）富血小板纤维蛋白是对细胞无毒性的天然纤维网状支架材料，内含大量的白细胞。 （2）富血小板纤维蛋白可以促进细胞的增殖以及成骨分化，十分有益于作为组织工程骨支架材料。 （3）PRF作为支架材料复合BMSCs可以早期修复颊侧牙槽骨壁缺损。 （4）乳牙牙髓细胞可以作为与富血小板纤维蛋白复合的性能较佳的种子细胞。
【关键词】：组织工程 富血小板纤维蛋白 比格犬 乳牙牙髓细胞 骨髓间充质干细胞 牙槽骨缺失
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-11
• 缩略语说明11-15
• 绪论15-17
• 第一部分 富血小板纤维蛋白（PRF）的获取和结构特征17-22
• 1 序言17
• 2 材料与方法17-19
• 2.1 主要试剂与仪器17-18
• 2.2 实验方法18-19
• 3 结果19-21
• 3.1 富血小板纤维蛋白的制备和获取19-20
• 3.2 富血小板纤维蛋白的镜下结构20-21
• 4 讨论21-22
• 第二部分 富血小板纤维蛋白对骨髓间充质干细胞的体外成骨作用22-32
• 1 序言22
• 2 材料与方法22-27
• 2.1 主要试剂与仪器22-23
• 2.2 实验方法23-27
• 3 结果27-30
• 3.1 比格犬骨髓间充质干细胞的获得及培养27
• 3.2 骨髓间充质干细胞多向分化鉴定27-28
• 3.3 PRF 对骨髓间充质干细胞的体外作用28-30
• 4 讨论30-32
• 第三部分 富血小板纤维蛋白构建组织工程骨的研究32-39
• 1 序言32
• 2 材料与方法32-35
• 2.1 主要试剂与仪器32-33
• 2.2 实验方法33-35
• 3 结果35-37
• 3.1 CBCT 评价35-37
• 4 讨论37-39
• 第四部分 富血小板纤维蛋白（PRF）对比格犬牙髓细胞的体外作用39-53
• 1 序言39
• 2 材料与方法39-45
• 2.1 主要试剂与仪器39-40
• 2.2 实验方法40-45
• 3 结果45-51
• 3.1 比格犬乳牙牙髓细胞、恒牙牙髓细胞的获得及培养45-46
• 3.2 两种细胞多向分化鉴定46
• 3.3 MTT 实验46-47
• 3.4 碱性磷酸酶半定量和钙结节半定量结果47-49
• 3.5 RT-PCR 检测相关成骨基因49-51
• 4 讨论51-53
• 全文结论53-54
• 参考文献54-56
• 致谢56-57
• 在校期间撰写的文章57

【共引文献】

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本文编号：1122331