重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物抑癌作用的动物实验

发布时间：2017-12-19 12:14

本文关键词：重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物抑癌作用的动物实验　出处：《蚌埠医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：研究重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物的抗肿瘤性能，探讨制作新型载生物制剂抗肿瘤骨填充材料的可能性。磷酸钙骨水泥（CPC）不仅可以在体内吸收降解，被再生骨组织替代，而且还有良好的生物相容性和骨传导性，能够自行固化的骨填充物。还有它不像PMMA聚合固化时产生高热，且水泥粉末之间有相当的空间所以能成为良好的药物载体。常将CPC作为多肽类、有生物活性药物的载体。将抗肿瘤药物载入磷酸钙骨水泥，既能修复骨缺损同时又能杀灭残存的肿瘤细胞，主要用于骨肿瘤切除术后缺损充填，是近年来骨充填材料的研究热点之一。 p53基因是得到医学认可的抑制肿瘤基因之一，在人类百余种肿瘤中，有六成以上的发生与该基因的突变有关。重组人p53腺病毒由人基因p53与腺病毒（5型）充当载体重组而成的基因治疗肿瘤的药品，它有很高的安全性，还有很高的转染率等优点。它是一种广谱抗癌制品，能明显抑制肿瘤细胞的生长，特异性地引起肿瘤细胞凋亡，而正常细胞则无损伤。重组人p53腺病毒可以使机体受到刺激而发生抗肿瘤特异性的免疫变态反应，肿瘤组织局部用药后，能聚集肿瘤相关的杀伤性细胞在肿瘤组织周边，从而使肿瘤组织被灭亡。本研究旨在探讨复合具有抗肿瘤活性的骨充填材料即重组人p53腺病毒－CPC抗肿瘤复合骨水泥的方法，以获得有一定承载强度的抗肿瘤复合骨充填材料。合成聚乳酸－乙醇酸共聚物(PLGA)包埋重组人p53腺病毒的缓释微球，并将缓释颗粒以一定的百分比与磷酸钙骨水泥（Calcium Phosphate Cement，CPC）混合，这样就得到了一种全新的抗肿瘤骨水泥。研究其中抗肿瘤基因药物的体外释放、活性、抗肿瘤效应。抗肿瘤复合人工骨水泥的体外试验、动物试验，探讨其对肿瘤增长抑制。方法：本实验共三步：第一步运用乳化溶剂挥发法（w/o/o）制备重组人p53腺病毒PLGA缓释微球，制备出后在光学显微镜下观察其形态；第二步将重组人p53腺病毒PLGA缓释微球以8%的质量百分比与磷酸钙骨水泥复合，观察复合后其形态，并体外测定重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物中抑癌基因药物缓释情况；第三步荷瘤裸鼠模型将植入重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物，观察肿瘤生长情况，并进行对比参照实验，数据分析，以确定重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物是否对肿瘤有抑制治疗作用。结果：1、运用乳化溶剂挥发法，以聚乳酸－乙醇酸共聚物（PLGA）为载体，制备出重组人p53腺病毒PLGA缓释微球，微球无明显粘连、呈规则球形，表面光滑，大小分布均匀。制作过程方法简单，重复性好，可控性好。用该法制备的PLGA包裹的缓释微球在突释期释放药物较少，但是释放速度较快，稳定期释放药物长期稳定，主要是PLGA不断被分解吸收，药物不断释放出，时间可长达12天以上。 2、载体为磷酸钙骨水泥的缓释系统在药物缓慢释放的过程中，局部的药物浓度可以长期稳定存在。重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物能够缓慢释放重组人p53腺病毒12天之久，前期突放量小。磷酸钙骨水泥与PLGA包埋重组人p53腺病毒的缓释微球复合物所产生的缓释液可有效抑制胃癌细胞的增殖，具有很好的抑制肿瘤生长的生物活性。 3、重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物使荷瘤裸鼠体内的胃癌细胞大片坏死，可有效的抑制肿瘤的增殖。重组人p53腺病毒将来有希望是肿瘤治疗举足轻重的一员。重组人p53腺病毒PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物不仅可以填补骨缺损，而且可以释放药物起局部抗肿瘤作用，是一种全新的骨填充材料。可望成为骨肿瘤切除后良好的骨填充物或椎体转移性肿瘤经皮椎体成形强化的新型材料。结论：采用可降解的聚合物PLGA作为药物载体材料，制备重组人p53腺病毒PLGA缓释微球，工艺简便易行，稳定性好；重组人p53腺病毒能够从PLGA包埋微球中持续稳定的释放；重组人p53腺病毒PLGA缓释微球与磷酸钙骨水泥复合物(rAd-p53-PLGA-CPC)可提供理想的药物缓释作用；该复合物缓释液可在体外有效抑制胃癌细胞的增殖；rAd-p53-PLGA-CPC复合物在y|鼠体内可抑制胃癌移植瘤的生长、侵袭。本实验制备的rAd-p53-PLGA-CPC复合物集骨修复和抗肿瘤药物于一体，为骨肿瘤术后骨缺损或椎体转移性椎体肿瘤经皮微创椎体强化治疗提供了新思路，有望成为一种新型的具有抗肿瘤作用的骨充填材料。本研究新思路：首次率先合成重组人p53腺病毒（基因药物）PLGA缓释微球磷酸钙骨水泥复合物，，其不仅起到肿瘤术后的骨缺损的填充作用，而且同时具有可以长时间持续的抗肿瘤作用。既可用于四肢肿瘤，同时又能应用于脊柱肿瘤术中重建（如PKP、PVP），具有广泛的临床应用前景，为其它后期研究奠定了基础。还有望在肿瘤骨内或肿瘤椎体内注入该混合物，在有效杀灭肿瘤细胞的同时诱导骨替代，最终实现骨肿瘤逆转，使肿瘤组织转变成为骨组织，而避免了外科手术切除甚至截肢的可能性。
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08

【参考文献】

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