新型pH敏感聚阳离子基因载体的设计、制备及性能研究

发布时间：2017-12-23 16:36

  本文关键词：新型pH敏感聚阳离子基因载体的设计、制备及性能研究　出处：《江南大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：本文制备并表征了一种含有三级胺和环状原酸酯基团的新型阳离子均聚物——聚（N-（（2-（2-（二甲基氨基）乙氧基）-1，3-二氧戊环-4-基）甲基）甲基丙烯酰胺（PMAOE）。采用传统自由基聚合的方法合成了不同链长（19、64、82个重复单元）的PMAOE，通过核磁氢谱、凝胶色谱等技术对该均聚物进行了结构表征；采用核磁氢谱追踪特征峰的方法检测PMAOE的pH敏感性，结果显示，PMAOE具有pH敏感性，其原酸酯基团在酸性条件下发生环外降解，且降解速率随着pH的减小而增大。 本文通过静电作用的原理，将编码有表达绿色荧光蛋白的质粒DNA（pEGFP-N1）与PMAOE相互作用形成复合物纳米粒子。通过琼脂糖凝胶电泳实验、DNase I降解实验、肝素置换实验、EB排阻实验、粒径和电位测定考察了PMAOE压缩DNA的能力以及复合物的大小，，结果发现PMAOE在中性pH条件下可有效压缩质粒DNA，形成窄分布的复合物纳米粒子。DNA的压缩强度与PMAOE的链长有直接关系，链段越长，PMAOE压缩DNA的能力越强。通过琼脂糖凝胶电泳实验检测复合物的pH敏感性和DNA释放的可调控性。结果显示，PMAOE与DNA形成复合物后仍然具有pH敏感性，在酸性条件下，PMAOE的原酸酯基团发生降解，电荷减少，残留阳离子被中和，使PMAOE压缩DNA的能力减小，复合物稳定性减弱，进而解离，释放出质粒DNA。 本文还采用MTT法进行体外细胞毒性实验，评价PMAOE的生物相容性，结果表明，PMAOE与NIH3T3、HEK-293和COS-7细胞共培养均表现出较低的细胞毒性。通过荧光显微镜直接观察法和流式细胞术定量测定法进行体外细胞基因传递效果评价，初步研究结果说明，PMAOE介导pEGFP-N1在HEK-293和COS-7细胞中的基因传递效果在N/P为16时最佳。 本文揭示了一种pH可调控的DNA与阳离子聚合物结合及分离的独特机制，且PMAOE具有良好的生物相容性，在基因传递的应用中有望成为良好的生物材料。
【学位授予单位】：江南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08

【参考文献】

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本文编号：1324639