5-FU对人体胆管瘢痕成纤维细胞作用的实验研究

发布时间：2018-04-25 06:38

  本文选题：5-FU + 胆管瘢痕成纤维细胞　； 参考：《昆明医科大学》2012年硕士论文

【摘要】：目的： 研究5-FU对体外培养的人良性胆管瘢痕成纤维细胞的作用。 方法： 1、人良性胆管瘢痕成纤维细胞的复苏及传代培养。 2、分别用浓度为0.78125g/1、1.5625g/1、3.125g/1、6.25g/1、12.5g/1的5-FU加入培养的人良性胆管瘢痕成纤维细胞,在光镜下分组观察5-FU干预人良性胆管瘢痕成纤维细胞24h、48h、72h成纤维细胞的生长形态变化,并通过MTT比色法检测以上各组成纤维细胞增殖活性并计算细胞生长抑制率。选择半数抑制浓度(50%Inhibitiory concentration, IC50)值作为干预浓度(6.25g/L)。 3、流式细胞仪检测在最适干预浓度下5-FU干预人良性胆管瘢痕成纤维细胞的凋亡情况。 4、免疫荧光化学法测定人良性胆管瘢痕成纤维细胞在5-FU最适干预浓度作用后TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达的强度。 5、Western Blot方法检测TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达量。 结果： 1、5-FU干预人良性胆管瘢痕成纤维细胞72小时后,其抑制率为50%的浓度为6.25g/L。 2、5-FU干预胆管瘢痕成纤维细胞后,其生长曲线随着时间的延长和药物浓度的增大而受到明显的抑制。 3、5-FU干预人良性胆管瘢痕成纤维细胞后凋亡明显增加。 4、干预浓度(6.25g/L)5-FU作用于体外培养的人良性胆管瘢痕成纤维细胞,通过免疫荧光化学法和Western Blot方法测定成纤维细胞TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均低于对照组。 结论： 1.5-FU可抑制人体胆管瘢痕成纤维细胞的生长。 2.5-FU通过促进细胞凋亡的方式,抑制了人体胆管瘢痕成纤维细胞的生长； 3.5-FU干预人体胆管瘢痕成纤维细胞后,TGF-β1、a-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白表达明显降低。 4.本实验进一步揭示了5-FU治疗人良性胆管瘢痕狭窄的作用机制,为今后开展5-FU局部用药防治人良性胆管瘢痕狭窄提供实验依据。
[Abstract]:Objective: To study the effect of 5-FU on human benign bile duct scar fibroblasts in vitro. Methods: 1. Resuscitation and subculture of human benign bile duct scar fibroblasts. 2. The cultured human benign bile duct scar fibroblasts were added with 0.78125g / 1 / 1.5625g / 1 5-FU 3.125g / 1 5-FU 6.25g / 1 / 1 and 12.5g / 1 respectively. The growth and morphological changes of human benign bile duct scar fibroblasts treated with 5-FU for 24 hours and 48 hours were observed under light microscope. MTT colorimetric assay was used to detect the proliferative activity of the fibroblasts and to calculate the cell growth inhibition rate. The inhibition concentration (IC50) of 50% inhibition concentration (IC50) was chosen as the intervention concentration of 6.25 g / L. 3. Flow cytometry was used to detect the apoptosis of human benign bile duct scar fibroblasts treated with 5-FU at the optimal concentration. 4. The expression of TGF- 尾 _ 1a -SMA, type 鈪，

本文编号：1800167