壳聚糖酶基因在软骨细胞中的表达及对壳聚糖介导基因转染的影响

发布时间：2018-05-14 18:41

  本文选题：壳聚糖酶 + 壳聚糖　； 参考：《中国矫形外科杂志》2014年22期

【摘要】：[目的]探讨携带壳聚糖酶(CSN)基因的重组慢病毒感染软骨细胞后影响CSN活性的因素,及CSN在壳聚糖(CS)/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞中的作用。[方法]构建携带CSN和红色荧光带白(RFP)基因的重组慢病毒(LV-CSN)并感染兔关节软骨细胞,流式细胞仪及荧光显微镜检测其感染率;二硝基水杨酸比色法(DNS)检测对CSN活性的影响因素;以CS/DNA纳米粒介导体外基因转染软骨细胞,检测CSN对CS/DNA纳米粒介导基因转染软骨细胞的作用。[结果]带RFP基因的LV-CSN感染软骨细胞后48 h和第7 d,RFP表达率分别为(91.40±0.98)%和(91.67±1.00)%,二者差异无统计学意义(P=0.583)。p H值、温度及铜离子浓度对CSN的活性有明显影响。LV-CSN感染软骨细胞后CS/DNA组的基因转染效率显著高于裸p DNA组和CS/DNA组(P0.05),但铜离子可以拮抗这种作用。[结论]在一定时间内LV-CSN感染软骨细胞后可稳定表达CSN,CSN的活性受p H值、温度及铜离子浓度的影响;CSN可提高CS/DNA对软骨细胞的基因转染效率,铜离子则可拮抗这种作用。
[Abstract]:[objective] to investigate the factors that affect the CSN activity of chondrocytes infected with recombinant lentivirus carrying Chitosanase (CSN) gene and the role of CSN in gene transfection of chondrocytes mediated by CSN / DNA nanoparticles. [methods] Recombinant lentivirus (LV-CSN) carrying CSN and red fluorescent band (RFP) gene was constructed and infected with rabbit articular chondrocytes. The infection rate of LV-CSN was detected by flow cytometry and fluorescence microscopy. Chondrocytes were transfected into chondrocytes by CS/DNA nanoparticles in vitro. The effect of CSN on gene transfection of chondrocytes mediated by CS/DNA nanoparticles was examined. [results] the rFP expression rates of LV-CSN infected chondrocytes with RFP gene were 91.40 卤0.98% and 91.67 卤1.00% at 48 h and 7 d, respectively. There was no significant difference between them. The gene transfection efficiency of CS/DNA group was significantly higher than that of bare p DNA group and CS/DNA group, but copper ion could antagonize the activity of CSN. [conclusion] after LV-CSN was infected with chondrocytes for a certain time, the activity of CSN could be stably expressed in chondrocytes. The effect of temperature and copper ion concentration on the expression of CSN could increase the gene transfection efficiency of CS/DNA on chondrocytes, and copper ion could antagonize this effect.
【作者单位】： 中山大学附属第三医院骨科;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81272040) 广东省自然科学基金资助项目(编号:S2011010004808,S2013010016385) 广东省科技计划基金资助项目(编号:2012B031800451)
【分类号】：R318.08

【参考文献】

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【共引文献】

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3 张e

本文编号：1889032