白及微球实验研究

发布时间：2018-11-27 21:33

【摘要】：目的：分离纯化白及多糖。材料与方法：60℃热水回流提取,Savage法脱蛋白,石油醚脱脂,活性碳脱色,阴离子交换纤维素柱(DE-52)和凝胶柱(SephadexG-100)层析得白及多糖。结果：热水提取的白及多糖为乳白色无嗅无味粉末,经DE-52柱和Sephadex G-100柱层析得均一组分,白及多糖的平均得率为(1.9+0.2)%。结论：该方法简单方便、稳定可行,提取的白及多糖可供制备白及微球。目的：探讨白及多糖的抗肿瘤作用。材料与方法：体外细胞培养的人胃癌细胞(sgc)、人卵巢癌细胞(A2780)和肝癌细胞(HepG2)经不同剂量白及多糖处理后,应用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪测定白及多糖对三种肿瘤细胞周期的影响。结果：白及多糖对人胃癌细胞、人卵巢癌细胞和肝癌细胞的增殖抑制作用具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测显示经200ug/ml白及多糖作用72h后,人胃癌细胞G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少；人卵巢癌细胞S期细胞增多,G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞无明显变化；肝癌细胞GO/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少。结论：白及多糖可通过抑制人胃癌细胞(sgc)、人卵巢癌细胞(A2780)和肝癌细胞(HepG2)的生长增殖、细胞周期阻滞作用发挥抗肿瘤作用。目的：制备白及微球并观察其表征。材料与方法：乳化-冷凝-化学交联法制备空白白及微球,单因素及正交实验对制备工艺进行优化。激光粒度仪测定微球大小,观察微球分散性、悬浮性和沉降时间、吸水溶胀率、导管推注表现及溶解时间。结果：水、油相比和白及多糖浓度对微球粒径及产率影响较大。微球在生理盐水与造影剂欧乃派克中形成不稳定悬液,分散性良好,沉降时间与粒径成正比。微球在生理盐水中溶胀速度快于造影剂中,不同pH值时溶胀率无明显变化。微球较容易通过5F导管,但大于400um的微球吸水后难以通过3F微导管,约6周后微球完全融解。结论：改良法制备的白及微球符合栓塞剂的基本特征。目的：研究白及微球的生物相容性。材料与方法：行白及微球热原试验,MTT法观察白及微球对小鼠成纤维细胞、人脐静脉血管内皮细胞增殖的影响。观察白及微球的血液相容性。评价白及微球种植于日本大白兔背部肌肉内的组织炎症反应和栓塞日本大白兔右肾动脉后动脉管壁变化。结果：白及微球对鼠成纤维细胞、人脐静脉血管内皮细胞增殖无明显影响,血液相容性良好,无溶血现象。大白兔肌肉植入部位大体观察无异常,病理学检测组织炎症反应程度低,栓塞日本大白兔肾动脉后见肾血管管壁炎性反应轻微,肝、肾功能较快恢复正常水平。结论：白及微球生物相容性良好,可作为中期栓塞剂应用于临床。白及微球栓塞日本大白兔肾动脉的实验研究见我科宋松林硕士毕业论文。目的：评价白及微球对兔VX2移植性肝癌的栓塞治疗效果。材料与方法：建立15只日本大白兔VX2移植性肝癌模型,平均分为3组,A组经肝动脉灌注生理盐水,B组经肝动脉注入超液态碘油+阿霉素,C组经肝动脉注入白及微球栓塞治疗(200um)。术前及术后2w分别用MRI检测肿瘤大小并计算肿瘤生长率；复查DSA检测栓塞维持时间、肿瘤血管有无再通和侧枝循环情况。病理学观察组织形态,栓塞剂分布；免疫组化染色检测肿瘤细胞凋亡、凋亡相关因子Bax、bcl-2及肿瘤血管细胞内皮生长因子(VEGF)。结果：兔VX2移植性肝癌荷瘤兔术后2w肿瘤增长率、凋亡率、凋亡相关因子bax、bcl-2及VEGF组间两两比较B、C组无明显差异(P0.05),B、C组与A组差异有明显统计学意义(P0.05)。2w后复查造影白及微球栓塞组肿瘤血管无再通,无侧枝循环血管形成,肿瘤组织坏死并被无结构组织代替,肿瘤血管内可发现白及微球。结论：白及微球使用方便、安全,栓塞血管效果良好,是一种理想的外周血管栓塞剂。白及微球对兔VX2移植性肝癌栓塞治疗效果良好。目的：探讨建立日本大白兔子宫肌瘤动物模型和白及微球经动脉栓塞治疗日本大白兔子宫肌瘤模型的可行性。材料与方法：20只雌性日本大白兔,实验组15只采用雌孕激素联合法诱导建立子宫肌瘤模型,5只后大腿肌肉注射生理盐水设为对照组。20周后实验组剩下10只实验兔,然后平均分成两组,A组在双侧髂内动脉注入白及微球行栓塞治疗(200um),B组在双侧髂内动脉注入PVAs(300um)设为对照组。介入栓塞术后第二天处死实验兔,病理学观察组织形态,栓塞剂分布,免疫组化染色检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)。结果：成功建立10只子宫肌瘤模型,造模成功率为66.7%。实验组大体观子宫明显肿胀、结节形成；镜下观察子宫平滑肌增生,细胞排列紊乱,平滑肌增厚,部分呈瘤样增生,实验组与对照组比较局部ER、PR检测存在显著差异。用白及微球和PVAs栓塞后,子宫大体标本均未见明显坏死,镜下见小动脉内有栓塞剂及血栓形成。结论：雌孕激素联合法诱导能建立子宫肌瘤模型,保持了人子宫肌瘤的生物学特性；应用白及微球行日本大白兔子宫肌瘤模型动脉栓塞术具有可行性。
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【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R285.5

【参考文献】