3-氨基苯甲酰胺对高糖培养的牛视网膜血管内皮细胞增殖的影响

发布时间：2019-08-26 15:06

【摘要】：研究背景及目的 糖尿病视网膜病变（DR）作为糖尿病的严重并发症之一，造成严重的视力损害已引起广泛关注。本研究通过体外选择性培养牛视网膜血管内皮细胞(BREC)，探讨高糖环境对其的影响，并观察3-氨基苯甲酰胺（3-AB）对体外培养的高糖条件下的BREC生长及细胞增殖的影响，为糖尿病视网膜病变的治疗提供理论依据及治疗线索。 方法 ①体外分离牛视网膜组织，结合选择性培养基的使用等方法选择性培养牛视网膜血管内皮细胞，，Von Willebrand因子免疫组化鉴定，观察其形态学特点并制作生长曲线。②将传代后的细胞设为不同浓度梯度的葡萄糖和甘露醇对照组，以及空白对照组。四唑盐比色法描绘各干预组及对照组BREC的生长情况，流式细胞仪观察各种不同葡萄糖浓度对BREC影响。③分为低糖对照组、高糖对照组（30mmol/L）、高糖（30mmol/L）+不同浓度3-AB组（0.05mmol/L，0.1mmol/L，0.25mmol/L，0.5mmol/L，0.75mmol/L，1mmol/L），用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测BREC的增殖。采用流式细胞分析技术观察不同浓度3-AB对高糖环境中培养的BREC的凋亡的影响。 结果 ①选择性培养的BREC能够连续传代，且纯度达到98%以上，对VonWillebrand因子抗体染色阳性，BREC融合后呈铺路石样单层生长，有接触抑制。其生长曲线显示该细胞在传代后的第3～4d进入对数期增殖，到第10～12d进入平台期。②葡萄糖浓度在10mmol/L到25mmol/L之间时，四唑盐比色实验显示对细胞增殖有促进作用；葡萄糖浓度30mmol/L时，四唑盐比色实验显示抑制细胞增殖，同时，流式细胞分析在细胞周期的凋亡峰增加。③MTT比色法显示，一定浓度的3-AB可以降低高糖对BREC生长的抑制作用。在浓度为0.25mmol/L时OD值差异有统计学意义（P0.01）。流式细胞分析技术显示，0.25mmol/L的3-AB可明显减少BREC的凋亡。 结论 ①选择性培养方法的应用可获得较高纯度的BREC，简单且重复性好，无需额外除杂步骤。②葡萄糖在一定浓度时促进牛视网膜血管内皮细胞增殖，在一定的高浓度时抑制其增殖。③一定浓度的3-AB对体外高糖环境中培养的牛视网膜毛细血管内皮细胞具有保护作用，其机制可能在于3-AB可以减少细胞凋亡。
【图文】：

贴壁生长（见图1）。早期细胞形态呈长梭形，约 8~12 d 细胞生长至融合状态呈铺路石样（见图 2）。融合的细胞呈单层生长，存在接触抑制。BREC 的 Von Willebrand 因子多克隆抗体染色显示阳性（见图 3）。通过每高倍镜视野下目镜网格计数，得阳性细胞数大于98 %。一抗对照呈阴性（见图 4）。

图 1 原代培养 48 h 的 BREC 形态 SP×2001 Photograph of BREC 48 hours after primary eulture S1
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R318.18

【参考文献】

相关期刊论文 前4条

1 丁煜;柯根杰;顾永昊;;牛视网膜微血管内皮细胞的选择性培养方法[J];安徽医科大学学报;2012年02期

2 蒋玲;吕红彬;;细胞因子与糖尿病视网膜病变的研究进展[J];眼科研究;2009年12期

3 ;1994年中国糖尿病患病率及其危险因素[J];中华内科杂志;1997年06期

4 崔彦;许迅;毕宏生;;高糖对牛视网膜微血管内皮细胞和周细胞线粒体活性氧的影响[J];中华眼科杂志;2006年02期

本文编号：2529390