琼脂糖接枝透明质酸的生物活性及其用于皮肤再生的研究

发布时间：2020-02-25 23:20

【摘要】：目的：探讨琼脂糖接枝透明质酸在皮肤再生修复中的作用。 方法：用环氧氯丙烷活化琼脂糖，加入5kDa的透明质酸反应，透析纯化-冷冻干燥法制备得到琼脂糖接枝透明质酸共聚物；采用粘度法测定琼脂糖接枝透明质酸的分子量；通过红外光谱法、元素分析法、核磁共振法对材料进行结构表征；利用MTT法检测琼脂糖接枝透明质酸共聚物对成纤维细胞（3T3）的细胞毒性。对琼脂糖接枝透明质酸膜进行细胞粘附实验，评价材料的生物相容性；实时荧光定量PCR（Real-time PCR）实验检测材料分别作用于3T3细胞和巨噬细胞(RAW264.7)后，对3T3细胞中Ⅰ型及Ⅲ型胶原和对RAW264.7细胞中TNF-αmRNA表达水平的影响；并进一步通过蛋白质免疫印迹（Western Blotting）实验表明材料作用于3T3细胞后，对细胞内分泌Ⅰ型胶原蛋白以及Ⅲ型胶原蛋白的影响。小鼠皮肤创伤修复实验，表征材料在小鼠皮肤伤口修复中的作用，并通过对修复部位的皮肤组织进行石蜡切片和HE染色分析小鼠皮肤伤口修复情况。 结果：红外光谱、元素分析以及核磁共振的分析结果表明成功制备出了琼脂糖接枝透明质酸共聚物。粘度法测得的琼脂糖接枝透明质酸聚合物的分子量约为100kDa左右。MTT法的结果表明，琼脂糖接枝透明质酸聚合物在2mg/mL浓度范围内，72h时间范围内，无细胞毒性。细胞粘附实验结果表明，经琼脂糖接枝透明质酸材料涂膜的玻片接种3T3细胞24h后，细胞能够很好地粘附到涂膜玻片上，细胞状态良好，表明材料能够和3T3细胞发生相互作用，进而粘附细胞。Real-time PCR实验结果表明，材料与3T3细胞作用后，3T3细胞中Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA水平显著上调，并且Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA水平的上调都随着琼脂糖接枝透明质酸材料溶度的增加而递增。Western Blotting实验进一步证实材料与3T3细胞作用后，细胞中Ⅰ型胶原蛋白以及Ⅲ型胶原蛋白的表达水平显著上调，并且Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平的上调都随着琼脂糖接枝透明质酸材料溶度的增加而递增，这一结果与之前的Real-time PCR的结果相一致。小鼠皮肤创伤修复实验结果表明，琼脂糖接枝透明质酸材料可以减少伤口炎症反应和瘢痕形成，促进血管生成，，加速小鼠皮肤伤口愈合。最后修复部位的皮肤组织的石蜡切片和HE染色结果表明，琼脂糖接枝透明质酸材料组伤口复原情况好，皮肤创伤经修复后的组织与正常组织类似。 结论：琼脂糖接枝透明质酸共聚物不仅能够与3T3细胞相互作用，促进细胞粘附，还能够提高3T3细胞中Ⅰ型胶原以及Ⅲ型胶原的蛋白表达水平，可以有效促进皮肤修复再生。
【图文】：

皮肤的创面愈合是一个复杂却有序的生物过程，在每个时期都有许多组织外基质、细胞因子等参与，涉及一系列的生物学过程，如出血、血管反应反应、肉芽组织形成、再上皮化及修复后的重塑等[18]，如图 1.1 所示。

Agarose-g-HA 的图谱 b 中可以明显看到出现了两个新的特 1739cm-1 以及 1644-1 附近分别是透明质酸上的羧基峰和酰胺带Ⅲ动吸收峰[76]，这表明 Agarose-g-HA 接枝共聚物上有透明质酸的特一步可以说明 Agarose-g-HA 接枝反应是有效的。
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R318.08

【参考文献】

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本文编号：2582854