PFM金属基底对斑马鱼胚胎及幼鱼的毒性研究

发布时间：2020-05-31 07:12

【摘要】：目的:瓷熔附金属全冠(PFM)是口腔临床中最常用的修复手段之一,但是PFM金属基底的体内毒性尚未明确。本研究选择临床常用的PFM的金属基底,检测和比较其对斑马鱼胚胎及幼鱼发育的影响,对其安全性进行评估,进而为临床修复体材料的选择提供参考依据。材料和方法:将金合金、银钯合金、镍铬合金、钴铬合金、钛合金烤瓷冠的金属基底制备而成的标准试件,用人工唾液分别浸泡1、4、7周;收集浸提液,将受精后4小时的斑马鱼胚胎暴露在金属浸提液中至144小时,以检测浸提液对斑马鱼胚胎和幼鱼的影响。通过在不同的时间点统计斑马鱼胚胎及幼鱼的死亡率,胎动,心率,孵化率,畸形率和幼虫行为测试毒性。用浸提液预处理发育正常的4hpf胚胎,采用DCFH-DA荧光探针检测24hpf胚胎体内的活性氧水平;在24hpf,使用吖啶橙(AO)染色法检测和实时荧光定量分析(RT-PCR)对照组及实验组斑马鱼胚胎体内的凋亡细胞和凋亡相关基因的表达进行检测。结果:5种PFM的1W浸提液没有显示斑马鱼毒性。而4W和7W浸提液中,镍铬合金组斑马鱼死亡率、畸形率明显升高,胎动、心率和游泳距离明显降低,钴铬合金组和银钯合金组同样出现斑马鱼死亡率、畸形率升高及胎动、心率和游泳距离的降低但程度较镍铬合金组低,而且镍铬合金、钴铬合金、银钯合金的7D浸提液毒性均大于4W浸提液,而4W、7W钛合金组、金钯合金组和人工唾液组死亡率、畸形率、胎动、心率及游泳距离与对照组无统计学差异。镍铬合金浸提液对斑马鱼胚胎内ROS水平以及SOD活性的影响:24 hpf时,1W组斑马鱼胚胎体内ROS水平及SOD活性与对照组无差异,4W、7W组斑马鱼胚胎体内ROS水平显著升高,SOD活性显著降低(P0.001)。镍铬合金浸提液对斑马鱼胚胎凋亡的影响:AO染色显示1W组斑马鱼胚胎的早期凋亡细胞较对照组无统计学差异,4W、7W组可显著增加细胞凋亡;RT-PCR显示1W实验组的促凋亡基因Bax、Caspase9、Caspase3的表达量与对照组无统计学差异(P0.05),与对照组相比,实验组抗凋亡基因Bcl2的表达量降低(P0.05);而4W、7W实验组与对照组相比,促凋亡基因Bax、Caspase9、Caspase3的表达明显上调,抗凋亡相关基因Bcl2也出现显著下调(P0.05)。结论:临床常用的PFM的金属基底中,镍铬合金具有较强的毒性,钴铬合金和银钯合金次之,钛合金和金合金具有较好的生物相容性,因此在临床工作中,应根据具体情况和合金的毒性情况选择最适合患者的合金材料。镍铬合金7W组浸提液一方面因金属离子的的直接作用增加ROS来源,另一方面通过抑制SOD活性减少ROS的消除,使ROS在斑马鱼胚胎内堆积,继而通过氧化应激反应,对斑马鱼胚胎造成损伤。镍铬合金7W组浸提液一方面通过促进凋亡相关基因的表达产生凋亡作用,另一方面通过抑制抗凋亡相关基因的表达抑制DNA损伤的修复,对斑马鱼胚胎造成损伤。
【图文】：

浸提液,时长,死亡率,合金

图 1 不同浸泡时长的合金浸提液对死亡率的影响。每个值表示为平均值±SEM（N =100）。与对照组相比，* P <0.05，** P <0.01 和*** P <0.001。Figure 1 Effect of alloy leaching solution with different durations on mortality. Each value isxpressed as the mean ± SEM (N = 100). *p<0.05, ** p<0.01 and *** p<0.001 versus the control

时长,浸提液,孵化率,合金

图 2 不同浸泡时长的合金浸提液对孵化率的影响。每个值表示为平均值±SEM（N = 3）。与对照组相比，* P <0.05，，** P <0.01 和*** P <0.001。Figure 2 Effect of alloy leaching solution with different durations on hatchability. Eachvalue is expressed as the mean ± SEM (N = 3). *p<0.05, ** p<0.01 and *** p<0.001 versusthe control group.
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R783.1

【参考文献】