纳米材料体外细胞毒性试验标准的关键项目研究

发布时间：2017-03-26 16:09

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【摘要】：目的:参考ASTM标准,研究纳米材料体外细胞毒性检测方法(MTT试验和LDH试验)中的关键项目指标,为制定纳米材料体外细胞毒性试验标准提供实验依据。方法:通过全波长扫描获得MTT试验和LDH试验的检测波长;测试阳性对照品APAP的使用剂量和保存条件;通过改变MTT试剂的配制介质,以及DMSO溶解后加入和不加入甘氨酸缓冲液来测试MTT试验条件;考察含不同浓度血清(10%,5%,2.5%)的细胞培养液对LDH试验的背景影响;在确定优化的实验条件下用MTT试验和LDH试验,对某纳米银凝胶产品进行细胞毒性评价。结果:MTT试验和LDH试验在测定吸光度时双波长可分别设定为540～570/680 nm和490/680 nm。APAP作为阳性对照的合适浓度为20～30 mmol.L-1,该溶液保存条件为-20℃,14 d内有效。血清对LDH试验的干扰与浓度呈正相关,为确保细胞正常生长,该方法中血清浓度确定为10%,血清造成的背景值干扰可从空白组扣除。纳米银凝胶产品MTT试验和LDH试验结果(IC50)分别为26.8 mg.mL-1和61.8 mg.mL-1。结论:MTT试验和LDH试验相结合可以在1个实验体系内获得2个检测结果,能够更全面地评价纳米材料可能引起的细胞毒性。本课题确定了纳米材料体外细胞毒性检测方法(MTT试验和LDH试验)的关键项目指标,使该方法具有良好的操作性与可行性。
【作者单位】： 中国食品药品检定研究院;
【关键词】： 纳米材料 细胞毒性 -( -二甲基--噻唑)- 二苯基-氢-四氮唑溴盐试验 乳酸脱氢酶试验 标准研究 医疗器械
【基金】：国家科技支撑计划:支撑认证认可的评价分析/检测验证与有效性保障技术研究与示范;(2012BAK26B00),子课题:快速检测关键材料评价技术研究与示范 东南大学生物电子学国家重点实验室开放研究基金:纳米医疗器械的免疫学研究(2011E04) 北京市自然基金:纳米银透过体外血脑屏障模型引起脑神经毒性的机理研究(311204) 中国食品药品检定研究院学科带头人基金:金银敷料中银存在形式和释放特性的表征方法研究(2012X2) 中央财政支持国家局医疗器械行业标准(N2012099－T－zjs)
【分类号】：R318.08
【正文快照】： 医疗器械生物学评价系列标准(GB/T 16886)中细胞毒性评价是一项常规评价项目[1],其中的MTT试验主要是评价医疗器械本身或浸提液可能引起的细胞线粒体功能障碍,即琥珀酸脱氢酶活性的抑制,从而考察细胞活性和生长状态,可以用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5二苯基-2氢-四氮唑溴盐(MTT

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 杨辉;杨丹凤;张华山;张伟;刘焕亮;刘超;袭著革;;4种典型纳米材料对小鼠胚胎成纤维细胞毒性的初步研究[J];生态毒理学报;2007年04期

2 徐丽明;陈亮;董U，

本文编号：269034