皮肤诱导再生材料的生物相容性评价和有效性评价

发布时间：2020-06-06 21:14

【摘要】：皮肤作为人体最大的器官,是保护机体的第一道屏障,极易受到损伤,很多因素均可导致皮肤损伤。由此造成的医疗负担已经成为日趋严重的卫生问题。随着再生医学近年来的深入发展,皮肤诱导再生材料成为现阶段皮肤创伤修复领域的研究热点之一,但是目前我国对于皮肤诱导再生材料的研究大多处在实验阶段,并没有商品化的产品问世。本课题选择三种市面上常用的材料(胶原、羧甲基壳聚糖、生物玻璃)作为皮肤诱导再生材料,初步探究三者的生物相容性以及三者作为皮肤诱导再生材料的有效性,为皮肤诱导再生材料的深入研究提供理论支持。通过羟脯氨酸含量测定实验、傅里叶变换红外光谱实验、生物玻璃含量测定实验,确定了厂家提供的三种样品是本课题所需的胶原、羧甲基壳聚糖和生物玻璃材料,为三种材料的进一步评价提供了基础。评价三种皮肤诱导再生材料的生物相容性:通过细胞毒性实验可知,三种材料均无潜在细胞毒性;通过细菌回复突变实验可知,三种材料无明显的致突变性;通过染色体畸变实验可知,三种材料均无潜在的致畸变性;通过全身急性毒性实验可知,三种材料均不会导致小鼠出现急性全身毒性反应;通过迟发型超敏反应实验可知,三种材料均不会导致豚鼠出现过敏反应的迹象。三种材料均表现出了良好的生物相容性。建立糖尿病大鼠皮肤损伤动物模型:通过腹腔一次性大剂量注射链脲佐菌素(STZ,75mg/kg),可成功构建稳定的I型糖尿病大鼠动物模型;接着通过除去动物背部一块全层皮肤(2cm×2cm),即可成功建立I型糖尿病大鼠皮肤损伤动物模型,为评价三种皮肤诱导再生材料的有效性提供了模型基础。评价三种材料的有效性:将三种材料应用于动物模型,评价三者的效果。通过大体观察,胶原组、羧甲基壳聚糖组和生物玻璃组动物皮肤的愈合情况均优于对照组;通过愈合率的比较,胶原组和生物玻璃组术后第3、7、14、21天的愈合率均高于空白对照组,促进皮肤愈合效果明显,而羧甲基壳聚糖组术后第7、14、21天的愈合率均低于空白对照组,未能有效地促进皮肤愈合;HE染色结果显示,术后第14天,胶原组和生物玻璃组已出现层次分明的表皮、真皮结构,皮肤附属器清晰可见,皮肤愈合程度明显优于对照组,羧甲基壳聚糖组仍未形成层次分明的表皮、真皮结构,未见皮肤附属器,愈合效果不佳;术后第21天,各组动物皮肤均已基本愈合。通过本课题的研究,发现胶原、羧甲基壳聚糖、生物玻璃材料均表现出良好的生物相容性,其中胶原和生物玻璃可以一定程度上促进糖尿病大鼠皮肤损伤的愈合,而羧甲基壳聚糖的效果并不明显。
【图文】：

氨基酸,标准品,图谱,羟脯氨酸

V : 稀释体积，单位为 mLA1：样品中羟脯氨酸峰面积An：氨基酸对照品中 L-羟脯氨酸峰面积m：样品质量，单位为 g1.4 实验结果由氨基酸标准品的保留时间可知，待测样品的酸水解产物含有 15 种氨基酸（见图 1.1～1.4），分别为天门冬氨酸（Asp），丝氨酸（Ser），苏氨酸（Thr），谷氨酸（Glu），甘氨酸（Gly），丙氨酸（Ala），缬氨酸（Val），异亮氨酸（Ile），亮氨酸（Leu），苯丙氨酸（Phe），赖氨酸（Lys）,组氨酸（His），精氨酸（Arg），羟脯氨酸（Hypro），脯氨酸（Pro）；经计算得出，供试液中羟脯氨酸含量是9.20%，与文献报道的胶原中羟脯氨酸含量[45]较接近（约为 10%）。

羟脯氨酸,标准品,氨基酸,图谱

V : 稀释体积，单位为 mLA1：样品中羟脯氨酸峰面积An：氨基酸对照品中 L-羟脯氨酸峰面积m：样品质量，单位为 g1.4 实验结果由氨基酸标准品的保留时间可知，待测样品的酸水解产物含有 15 种氨基酸（见图 1.1～1.4），分别为天门冬氨酸（Asp），丝氨酸（Ser），，苏氨酸（Thr），谷氨酸（Glu），甘氨酸（Gly），丙氨酸（Ala），缬氨酸（Val），异亮氨酸（Ile），亮氨酸（Leu），苯丙氨酸（Phe），赖氨酸（Lys）,组氨酸（His），精氨酸（Arg），羟脯氨酸（Hypro），脯氨酸（Pro）；经计算得出，供试液中羟脯氨酸含量是9.20%，与文献报道的胶原中羟脯氨酸含量[45]较接近（约为 10%）。
【学位授予单位】：中国食品药品检定研究院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R318.08

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