碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对多孔钽—软骨细胞复合物细胞增殖及分化影响的实验研究

发布时间：2017-04-03 20:00

  本文关键词：碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对多孔钽—软骨细胞复合物细胞增殖及分化影响的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）体外对多孔钽-软骨细胞复合物细胞生长及增殖能力，检测bFGF增强软骨细胞表型维持，抑制去分化作用，从而探讨bFGF/多孔钽/软骨细胞复合物体内移植修复关节软骨缺损的理论依据。 方法分离培养3周龄幼兔膝关节软骨细胞，II型胶原免疫细胞化学染色、番红-O（Safranin-O）特殊染色鉴定软骨细胞；取生长状态良好的第3代细胞分为5组：A组（1ng/ml bFGF/多孔钽/软骨细胞），B组（10ng/ml bFGF/多孔钽/软骨细胞），C组（50ng/ml bFGF/多孔钽/软骨细胞），D组（多孔钽/软骨细胞）及E组（单纯软骨细胞）；MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽/软骨细胞生长及增殖状态；扫描电镜观察bFGF/多孔钽/软骨细胞复合物细胞形态及生长；I、II、IX、X型胶原免疫细胞化学染色以检测软骨细胞表型变化及去分化状态；实时荧光定量PCR检测软骨细胞II、X型胶原mRNA表达。 结果1软骨细胞鉴定：II型胶原免疫细胞化学染色和Safranin-O染色均呈阳性反应，证实所分离培养的细胞为软骨细胞。2MTT法检测软骨细胞生长、增殖：不同时间点各实验组（A、B、C、D组）软骨细胞增殖与对照组（E组）相比较均有统计学差异（P0.05），实验组（A～C）软骨细胞增殖明显增强，且10ng/mlbFGF/钽/软骨细胞组（B组）细胞增殖能力最强，同时各组间比较也存在统计学意义（P0.05）。3扫描电镜观察结果：各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、粘附，早期呈不等的球形，24小时后胞浆延展并向周围伸出多条突起，相互连接、延展向孔隙内部生长，细胞间相互融合，部分区域覆盖支架材料。4免疫细胞化学染色检测3,7天软骨细胞I、II、IX和X型胶原表达：10ng/ml bFGF/钽/软骨细胞组（B组） II和IX胶原免疫细胞化学染色呈强阳性，高于对照组（E组）（P0.05），并且各组间比较也存在统计学意义（P0.05）；而10ng/ml bFGF/钽/软骨细胞组（B组）I和X型胶原免疫细胞化学染色呈弱阳性或阴性，与对照组或其它各组比较也存在统计学意义（P0.05）。5实时荧光定量PCR检测3,7天软骨细胞II、X型胶原mRNA表达：各实验组（A～D组）II型胶原mRNA呈高表达，与对照组（E组）相比其表达量有统计学差异（P0.05）；而X型胶原mRNA表达量低于对照组（P0.05）。 结论1bFGF与多孔钽支架材料-软骨细胞共培养时，能促进软骨细胞增殖和正常表型的维持，并且能抑制软骨细胞去分化。210ng/ml bFGF是促进多孔钽-软骨细胞增殖，抑制其分化的最佳浓度。3bFGF可促进多孔钽/软骨细胞II型胶原mRNA的表达，抑制X型胶原mRNA的表达。说明bFGF/多孔钽/软骨细胞复合物可能成为软骨损伤修复材料而应用于临床。
【关键词】：碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） 多孔钽 细胞表型 去分化 软骨细胞
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R318.08;R687.3
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 实验研究13-41
• 1.1 材料与方法13-19
• 1.1.1 实验药品与试剂13-14
• 1.1.2 实验方法与步骤14-19
• 1.2 结果19-34
• 1.2.1 软骨细胞形态观察与鉴定结果19-22
• 1.2.2 软骨细胞增殖情况 MTT 法检测结果22-24
• 1.2.3 各实验组软骨细胞 I、II、IX、X 型胶原免疫细胞化学染色检测结果24-32
• 1.2.4 实时荧光定量 PCR 检测 bFGF/多孔钽/软骨细胞共培养软骨细胞II 型胶原和 X 型胶原 mRNA 的表达32-34
• 1.3 讨论34-37
• 1.3.1 多孔钽支架材料的选择34-35
• 1.3.2 bFGF 功能及其对多孔钽-软骨细胞增殖的影响35
• 1.3.3 bFGF 对多孔钽/软骨细胞复合物 I、II、IX、X 型胶原表达影响及其与软骨细胞表型的关系35-36
• 1.3.4 bFGF 促进多孔钽/软骨细胞复合物 II 型胶原、X 型胶原 mRNA 表达36-37
• 1.3.5 不足与展望37
• 1.4 结论37
• 参考文献37-41
• 第2章 综述 多孔钽关节融合的历史与前景41-53
• 2.1 多孔钽的特性介绍41-46
• 2.1.1 多孔钽的制备及力学性能42-43
• 2.1.2 多孔钽的生物相容性43-44
• 2.1.3 多孔钽对成骨细胞的作用及骨内生长性44-45
• 2.1.4 多孔钽的纤维组织增长特性及流体流动特性45
• 2.1.5 多孔钽的软骨传导潜力45-46
• 2.2 多孔钽在骨科的应用46-48
• 2.2.1 多孔钽关节置换术中的应用46
• 2.2.2 多孔钽在椎间关节融合中的应用46-47
• 2.2.3 多孔钽在踝关节融合中的应用47-48
• 2.2.4 多孔钽在腕关节融合中的应用48
• 参考文献48-53
• 致谢53-54
• 导师简介54-55
• 作者简介55-56
• 学位论文数据集56

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 欧阳松应,杨冬,欧阳红生,马鹤雯;实时荧光定量PCR技术及其应用[J];生命的化学;2004年01期

2 杨亚东;薄占东;;应用组织工程技术修复关节软骨缺损的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2011年14期

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本文编号：284863