脱细胞气管基质材料生物相容性的研究

发布时间：2017-04-06 21:14

  本文关键词：脱细胞气管基质材料生物相容性的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：气管由于外伤、肿瘤及先天性疾病造成的长段气管缺损在临床上较为常见,须通过合适的气管替代物进行修复重建。组织工程技术为气管的修复重建提供了新的途径。脱细胞气管基质材料具有与正常组织相似的组成和结构,为组织工程气管提供了良好的脱细胞气管基质材料。本实验目的在于探讨用高氯酸钠(NaC104)脱细胞方法获取的脱细胞气管基质材料的生物相容性,在此基础上还比较该脱细胞气管基质材料及其分别与京尼平、戊二醛交联后的生物相容性。方法：1.将体重250±50g的幼年新西兰兔作为间充质干细胞(MSCs)的供体,将兔麻醉后从胫骨平台抽取骨髓,用全血培养法进行体外培养、增殖,并通过贴壁性、多项诱导分化能力进行鉴定。2.将2000±500g的成年新西兰兔作为气管的供体,经过5%NaClO4脱细胞处理后,进行组织学HE染色、DAPI染色、扫描电镜观察。3.将脱细胞气管基质材料纵向剖开并平均分成0.5*0.5cm小方块,随机分成3组：脱细胞气管组(A组),脱细胞气管+1%京尼平组(B组),脱细胞气管+0.625%戊二醛(C组)。将生长较好的第三代间充质干细胞接种到三组脱细胞气管外壁表面,置于24孔板内进行体外培养,并通过干细胞接种及细胞活性观察、浸提液细胞毒性试验、扫描电镜观察评估细胞外基质的生物相容性。结果：1.MSCs培养及鉴定MSCs具有贴壁性,成簇生长,形态不一,多呈梭形、多角形。MSCs具有多向分化潜能,能被诱导成脂肪细胞及软骨细胞。2.脱细胞气管基质的鉴定HE染色显示气管上皮细胞已去除,粘膜层的基底层、粘膜下层和气管软骨组织的微观结构基本保留完整,外壁结构疏松。DAPI染色显示上皮细胞核、粘膜下层细胞核明显减少,软骨细胞核保留活性,染色显示蓝色荧光。电子显微镜下示气管上皮完全去除,基底膜结构完整。3.干细胞接种及细胞活性鉴定A、B组材料安全性较好,周围的细胞贴壁生长,未见悬浮细胞。C组材料安全性差,周围见死亡细胞悬浮。4.浸提液细胞毒性检测A和B组浸提液能促进细胞增殖,B组促进细胞增殖效果优于A组。C组浸提液有毒性,细胞死亡。5.扫描电子显微镜A组组织材料的生物相容性好,细胞在气管基质材料外壁上贴附良好,形成单层片状,覆盖气管基质材料外壁间隙,局部可见料暴露区域；B组组织材料的生物相容性最好,气管基质材料外壁间隙基本被细胞填充、覆盖；C组脱细胞气管基质材料外壁仅局部可见细胞填充、覆盖。结论：1.MSCs具有多向分化潜能,是组织工程气管的构建良好的种子来源。2.5%NaClO4脱细胞处理获取的气管基质材料具有良好生物相容性,能支持种子细胞粘附和生长。3.京尼平作为一种天然蛋白交联剂,能有效提高脱细胞气管基质材料的生物相容性。
【关键词】：间充质干细胞 组织工程气管 生物相容性 京尼平
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-9
• 符号说明9-10
• 引言10-11
• 一、实验设计11
• 1 实验动物11
• 2 实验内容11
• 二、实验材料11-14
• 1 主要试剂11-12
• 2 实验用试剂配制12-13
• 3 实验仪器13
• 4 实验耗材13-14
• 三、实验方法14-17
• 1 MSCs的获取、培养及鉴定14-15
• 1.1 细胞原代培养14
• 1.2 细胞传代14
• 1.3 细胞鉴定14-15
• 2 脱细胞气管基质的获取及检测15-16
• 2.1 气管的获取15
• 2.2 脱细胞气管基质的制备15
• 2.3 脱细胞气管基质的检测15-16
• 3 细胞/脱细胞气管基质复合材料的制备及体外检测16-17
• 3.1 细胞/脱细胞气管基质复合材料的制备16
• 3.2 细胞/脱细胞气管基质复合材料的体外检测16-17
• 四、实验结果17-19
• 1 MSCs的鉴定17-18
• 1.1 镜下观察17
• 1.2 成脂诱导17-18
• 1.3 成骨诱导18
• 2 脱细胞气管基质的检测18
• 2.1 HE染色18
• 2.2 DAPI染色18
• 2.3 扫描电子显微镜18
• 3 细胞/脱细胞气管基质复合材料的体外检测18-19
• 3.1 MSCs接种及细胞活性18
• 3.2 浸提液细胞毒性检测18-19
• 3.3 扫描电子显微镜19
• 五、讨论19-22
• 参考文献22-25
• 结论25-26
• 附图26-34
• 综述34-42
• 参考文献39-42
• 致谢42-43
• 攻读学位期间发表的学术论文目录43-44

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