Semaphorin 3A壳聚糖微球-丝素基α磷酸三钙骨水泥细胞毒性及成骨性能研究

发布时间：2017-04-06 22:13

  本文关键词：Semaphorin 3A壳聚糖微球-丝素基α磷酸三钙骨水泥细胞毒性及成骨性能研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:制备复合Semaphorin 3A壳聚糖微球-丝素基α-磷酸三钙骨水泥(Semaphorin3A Chitosan Microspheres/Silk Fibroin/α-Tricalcium,Sema3A CMs/SF/α-TCP),并对该材料进行细胞毒性及体外成骨性能评估。方法:1.通过将家蚕生丝脱胶、溶解、透析、浓缩四个步骤制备丝素溶液,使用乳化交联法制备微米级壳聚糖微球,使用膨胀吸附法制备Sema3A载药壳聚糖微球,使用液-固法制备Sema3A CMs/SF/α-TCP,同时制备CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP。2.使用Sema3A ELISA试剂盒对CM的载药情况和Sema3A CMs/SF/α-TCP的药物释放性能进行检测。3.制备材料浸提液,使用浸提液培养MC3T3-E1细胞系,设定阴性对照组和阳性对照组,通过MTT法及培养液乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)活性测定检测材料的细胞毒性。4.将MC3T3-E1细胞分别种植于Sema3A CMs/SF/α-TCP、CMs/SF/α-TCP及SF/α-TCP材料表面,使用扫描电镜观察Sema3A CMs/SF/α-TCP材料表面的细胞形态,分别检测其细胞培养液中的碱性磷酸酶(Alkline Phosphatase,ALP)活性,并通过RT-q PCR,检测其成骨相关基因Runx2、Col-1及ALP的表达情况。结果:1.使用乳化交联法成功制备出微米级壳聚糖微球,微球形态规则,分散良好。微球载药率为0.41μg/mg,Sema3A CMs/SF/α-TCP材料可持续释放Sema3A达30天,第30天的释放率为91.73%。2.Sema3A CMs/SF/α-TCP材料的细胞毒性为0级或1级。3.MC3T3-E1细胞系在材料表面形态良好,能够伸出伪足贴附于材料表面。4.Sema3A CMs/SF/α-TCP组的细胞培养液ALP活性在培养后的第14天和第21天高于其他分组,其中14天时间点各组ALP活性差异无统计学意义(P0.05),21天时间点的ALP活性差异具有统计学意义(P0.05)。5.在培养后的14天,Sema3A CMs/SF/α-TCP组中的成骨相关基因表达高于其他实验分组,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:复合Sema3A CMs/SF/α-TCP材料能够有效负载Sema3A并缓慢释放Sema3A,支持MC3T3-E1细胞系贴附、生长,无细胞毒性,并且可促进成骨相关基因的表达,提高ALP活性,具有一定的促进新骨生成能力。
【关键词】：α-磷酸三钙 丝素 壳聚糖微球 Semaphorin 3A蛋白 细胞毒性 骨诱导性
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R318.08
【目录】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 引言10-12
• 材料与方法12-20
• 结果20-26
• 讨论26-32
• 结论32-33
• 参考文献33-40
• 综述40-53
• 参考文献47-53
• 论文发表53-54
• 英文缩略词表54-55
• 致谢55-57

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