低粘附培养法体外构建三维预血管化成骨细胞微球
发布时间：2020-12-07 17:11
目的:通过将兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)、兔骨髓间充干细胞诱导分化形成的成骨细胞(osteoblast cells,OBs)和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)体外共培养,用低粘附培养法构建预血管化三维细胞微球,为血管化组织工程骨的构建提供一种新的策略。方法:(1)兔骨髓间充质干细胞的体外分离和培养:采用全骨髓贴壁法分离、培养、纯化细胞,倒置显微镜下观察细胞形态、增殖情况,拍照记录。(2)兔骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向的诱导分化:将第2代的兔骨髓间充质干细胞用含成骨诱导剂的培养基连续培养14天,倒置显微镜下观察细胞形态、增殖状况,茜素红染色鉴定成骨细胞。(3)人脐静脉内皮细胞的培养:观察细胞形态、增殖情况,拍照记录。(4)BMSCs细胞微球的构建:细胞悬液以1000个/孔、5000个/孔、10000个/孔、50000个/孔的接种密度接种在超低粘附96孔U型培养板中构建BMSCs微球,接种后的第1,3,7天在显微镜下观察并测量微球直径大小...
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BMSCs形态学观察:（A）P0BMSCs贴壁细胞呈长梭形，多角形，少量呈不规则形
BMSCs细胞悬液最初接种于超低粘附96孔板时，细胞散在分布，随着时间的推移，细胞自发聚集，24h内细胞微球形成。形成细胞微球的直径大小与细胞数量有关（图2）。当BMSCs接种密度为1000个/孔时，细胞微球的直径为197.7±2.1μm；当BMSCs接种密度为5000个/孔时，细胞微球直径为338.8±3.3μm；当BMSCs接种密度为10000个/孔时，细胞微球直径为418.1±4.3μm；当BMSCs接种密度为50000个/孔时，细胞微球直径为
11765.7±2.8μm。细胞微球的大小与细胞接种数量有关，细胞接种数量越大，形成的细胞微球直径越大（图3）。图 2 不同细胞数量的 BMSCs 接种于超低粘附培养板后 24h 形成的微球 (A)细胞数量为1000 个/孔 (B)细胞数量为 5000 个/孔 (C)细胞数量为 10000 个/孔 (D)细胞数量为 50000 个/孔(Scale bars=100μm)图 3 不同细胞数量的 BMSCs 接种于超低粘附培养板 24h 形成微球的大小将以1000个/孔、5000个/孔、10000个/孔、50000个/孔的细胞接种数量形成的BMSCs微球继续培养，在细胞接种后的第1，3，7天测量各组微球的大小，对数据进行统计学分析。结果表明各组细胞微球的直径均随着时间的推移在第1，3，7天逐渐减小，P<0.05表示结果具有统计学意义(图4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞在人半月板损伤修复中的潜在性应用[J]. 张爽,刘石,汪宇峰,吕婵,李保玲,王萍,丛军,朱志强. 风湿病与关节炎. 2018(04)
[2]口腔颌面组织工程血管的初步构建[J]. 杨兴华,彭琳,韩晓燕,陈岱韵. 中国组织工程研究. 2017(04)
[3]Mesenchymal stem cells require the peripheral immune system for immunomodulating effects in animal models of multiple sclerosis[J]. Laura Salinas Tejedor,Thomas Skripuletz,Martin Stangel,Viktoria Gudi. Neural Regeneration Research. 2016(01)
[4]基于兔BMSCs预血管化细胞膜片的体外构建[J]. 冯玉霞,汪洋,李琴,马东洋,任利玲. 中国修复重建外科杂志. 2014(10)
[5]大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及表型和功能特点[J]. 张本斯,王凡,邓力,顿爱社,董立华,李健,羊惠君. 四川大学学报(医学版). 2003(04)
本文编号：2903611
【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BMSCs形态学观察:（A）P0BMSCs贴壁细胞呈长梭形，多角形，少量呈不规则形
BMSCs细胞悬液最初接种于超低粘附96孔板时，细胞散在分布，随着时间的推移，细胞自发聚集，24h内细胞微球形成。形成细胞微球的直径大小与细胞数量有关（图2）。当BMSCs接种密度为1000个/孔时，细胞微球的直径为197.7±2.1μm；当BMSCs接种密度为5000个/孔时，细胞微球直径为338.8±3.3μm；当BMSCs接种密度为10000个/孔时，细胞微球直径为418.1±4.3μm；当BMSCs接种密度为50000个/孔时，细胞微球直径为
11765.7±2.8μm。细胞微球的大小与细胞接种数量有关，细胞接种数量越大，形成的细胞微球直径越大（图3）。图 2 不同细胞数量的 BMSCs 接种于超低粘附培养板后 24h 形成的微球 (A)细胞数量为1000 个/孔 (B)细胞数量为 5000 个/孔 (C)细胞数量为 10000 个/孔 (D)细胞数量为 50000 个/孔(Scale bars=100μm)图 3 不同细胞数量的 BMSCs 接种于超低粘附培养板 24h 形成微球的大小将以1000个/孔、5000个/孔、10000个/孔、50000个/孔的细胞接种数量形成的BMSCs微球继续培养，在细胞接种后的第1，3，7天测量各组微球的大小，对数据进行统计学分析。结果表明各组细胞微球的直径均随着时间的推移在第1，3，7天逐渐减小，P<0.05表示结果具有统计学意义(图4)。
【参考文献】：
期刊论文
[1]间充质干细胞在人半月板损伤修复中的潜在性应用[J]. 张爽,刘石,汪宇峰,吕婵,李保玲,王萍,丛军,朱志强. 风湿病与关节炎. 2018(04)
[2]口腔颌面组织工程血管的初步构建[J]. 杨兴华,彭琳,韩晓燕,陈岱韵. 中国组织工程研究. 2017(04)
[3]Mesenchymal stem cells require the peripheral immune system for immunomodulating effects in animal models of multiple sclerosis[J]. Laura Salinas Tejedor,Thomas Skripuletz,Martin Stangel,Viktoria Gudi. Neural Regeneration Research. 2016(01)
[4]基于兔BMSCs预血管化细胞膜片的体外构建[J]. 冯玉霞,汪洋,李琴,马东洋,任利玲. 中国修复重建外科杂志. 2014(10)
[5]大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养及表型和功能特点[J]. 张本斯,王凡,邓力,顿爱社,董立华,李健,羊惠君. 四川大学学报(医学版). 2003(04)
本文编号：2903611
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