毛细管凝胶及无胶筛分电泳分离检测宽分子量范围DNA片段的研究

发布时间：2021-02-02 00:03

　　人类基因组计划的迅速发展促进了核酸分析技术在突变检测、分子诊断和疾病预防以及治疗评估中的应用,寻找快速、易定量、自动化和高通量的核酸检测分析方法至关重要。毛细管电泳（Capillary electrophoresis,CE）具有分离效率高、操作模式多、试样消耗少等优点,已成为蛋白质和核酸等生物大分子分离分析中不可或缺的工具。毛细管凝胶电泳（Capillary gel electrophoresis,CGE）和毛细管无胶筛分电泳（Non-gel capillary electrophoresis,NGCE）是两种常用的操作模式。CGE可有效分离分子量范围为50²000 bp的较小DNA片段,具有较高分辨率。但是其凝胶黏度较大,制备和运行过程中容易产生气泡,使体系的稳定性和重现性变差,对于较宽分子量范围的DNA片段分辨率较低。NGCE以低粘度的线性高分子溶液为筛分介质,溶液中高分子之间相互交缠形成网孔,可起到筛分作用。这些低粘度的高分子溶液可提供更快速,更稳定的分离,允许更大的灵活性和压力注射,也更容易实现自动化。NGCE可以提供更大孔隙的筛分介质,有利于分离较宽分子... 

【文章来源】：河北大学河北省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 毛细管凝胶电泳
    1.3 毛细管无胶筛分电泳
        1.3.1 线性聚丙烯酰胺
        1.3.2 纤维素及其衍生物
        1.3.3 PEG
        1.3.4 PVP和 PEO
        1.3.5 混合高分子聚合物
    1.4 本论文的选题思路
第二章 毛细管凝胶电泳法分离分析PCR扩增产物中的DNA片段
    2.1 前言
    2.2 实验部分
        2.2.1 仪器与试剂
        2.2.2 溶液的配制
        2.2.3 毛细管凝胶柱的制备
        2.2.4 CGE分离条件
        2.2.5 参数计算
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 分离电压的选择
        2.3.2 进样电压的选择
        2.3.3 进样时间的选择
        2.3.4 CGE最佳分离条件的确定
        2.3.5 DNA片段分子量和迁移时间的关系
        2.3.6 PCR扩增产物中DNA片段分子量的确定
        2.3.7 方法学研究
    2.4 本章小结
第三章 毛细管无胶筛分电泳分离检测宽分子量范围DNA片段
    3.1 前言
    3.2 实验部分
        3.2.1 仪器与试剂
        3.2.2 溶液的配制
        3.2.3 筛分介质的配制
        3.2.4 LPA涂层毛细管柱的制备
        3.2.5 NGCE分离条件
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 NGCE的分离条件和筛分机理
        3.3.2 方法学验证
        3.3.3 讨论
    3.4 本章小结
第四章 LPA涂层毛细管柱的优化制备及其在NGCE分离分析宽分子量范围DNA片段中的应用
    4.1 前言
    4.2 实验部分
        4.2.1 仪器与试剂
        4.2.2 溶液的配制
        4.2.3 筛分介质的配制
        4.2.4 LPA涂层毛细管柱的制备
        4.2.5 NGCE分离条件
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 AA单体浓度对涂层柱性能的影响
        4.3.2 5%LPA涂层毛细管柱重现性评价
    4.4 本章小结
第五章 结论与展望
    5.1 结论
    5.2 展望
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间取得的研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]受体基因重排检测PCR产物分析技术的研究进展[J]. 徐丹菲,崔巍.  中华医学杂志. 2015 (46)
[2]PCR产物酶联免疫检测法在临床检验中应用[J]. 李静.  中国农村卫生. 2014(13)
[3]毛细管电泳紫外检测条件下单碱基分离DNA片段[J]. 王前,许旭.  化学学报. 2004(01)
[4]无胶筛分毛细管电泳在蛋白质分离中的应用[J]. 张振中,吴逸明,蒋红丽,吴如金.  河南医科大学学报. 2000(03)
[5]毛细管电泳聚乙烯吡咯烷酮与羟乙基纤维素混配无胶筛分介质分离DNA片段[J]. 陈洪,张乐,刘笔锋,曾勇,程介克.  分析科学学报. 1999(06)



本文编号：3013671