猪小肠黏膜下层脱细胞基质中Ⅰ、Ⅲ型胶原检测方法研究
发布时间：2021-02-24 11:22
猪小肠黏膜下层脱细胞基质（SⅠS,Small intestinal submucosa）的主要成分为Ⅰ、Ⅲ型胶原,拟建立一种基于液相质谱联用（HPLC-MS）的胶原类型识别和定量检测方法。首先利用胰蛋白酶将胶原标准品和样品酶解,利用离子阱质谱（Ⅰon trap mass spectrometry, LCQ）识别出Ⅰ、Ⅲ型胶原的特征多肽分别为GETGPAGPAGPVGPVGAR、GPPGAVGPSGPR,再利用三重四极杆质谱（Triple quadrupole mass spectrometry, TSQ）对其进行定量;然后通过胶原标准品浓度和峰面积的线性关系计算Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结果表明VⅠDASⅠSTM和Biodesign?中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量总和与高效液相色谱法检测结果一致,通过HPLC-MS检测猪跟腱和真皮中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的结果符合其在组织中的分布规律;方法学实验表明HPLC-MS的精密度（RSD=2.38%）较高、稳定性良好。
【文章来源】：生物学杂志. 2020,37(05)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
猪胶原标准品酶解多肽总离子流图
采用上述方法得到猪I、III型胶原的特征多肽分别为GETGPAGPAGPVGPVGAR、GPPGAVGPSGPR。图 2和图 3分别为猪I型胶原标准品特征多肽经质谱分析后获得的提取离子流图以及二级质谱图。2.2.2 猪胶原特征多肽浓度与信号强度关系
分别对猪I、III型胶原特征多肽的目标离子m/z 773.9和533.09进行选择离子监测,以样品浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作线性回归曲线。图4和图5分别为猪I型胶原特征多肽GETGPAGPAGPVGPVGAR的提取离子流图和线性回归曲线[y=171.04x+4.154(R2=0.9984)],二者线性关系良好。利用相同的方法得到猪III型胶原的线性回归曲线为y=41.54x+1.63(R2=0.9981)。按照1.2.2中的方法处理样品,进行定量分析。2.2.3 猪不同组织ECM中胶原类型及含量检测结果分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]胶原蛋白的研究进展[J]. 邓浩,党政,尹青春,潘永波,徐彬,谭高好,王运选. 广州化工. 2019(18)
[2]猪小肠黏膜下层作为组织修复材料的研究进展[J]. 粟香,葛良鹏,李前勇. 中国比较医学杂志. 2019(08)
[3]胶原纤维的酶解液中羟脯氨酸含量测定方法的优化[J]. 张茜,卜德懿,田永鑫,鲜娇,张春晓,李艳红,彭必雨. 皮革科学与工程. 2019(03)
[4]非变性Ⅱ型胶原蛋白改善骨关节炎的研究进展[J]. 王海燕,孙君社,刘爱青,刘爽,邹国庆. 食品工业科技. 2019(15)
[5]Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和透明质酸酶在诊断肝纤维化程度中的应用[J]. 李慧萍,郑雪琴,赵群,唐建江. 检验医学与临床. 2019(05)
[6]脱细胞猪小肠黏膜下层基质中纤维连接蛋白定量检测方法研究[J]. 陈毅,夏磊磊,张扬,高建萍,李赛娜,雷雄心,李勇超,张贵锋,赵博. 生物学杂志. 2018(02)
[7]美洲大蠊提取液对慢性难愈合创面Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白调控研究[J]. 李文华,伍伟明,刘筱,杨敏,周雯婷,曾娟妮. 湖南中医药大学学报. 2018(03)
[8]糖化改性对胶原蛋白乳化性能的影响[J]. 申璇,袁久刚,王强,王平,范雪荣,徐进. 生物学杂志. 2017(05)
[9]牛关节软骨Ⅱ型胶原的分离纯化与鉴定[J]. 李赛娜,康跻耀,邓平晔,高建萍,张贵锋,王明林. 过程工程学报. 2016(04)
[10]正常皮肤与增生性瘢痕中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的含量与比例[J]. 王成,荣艳华,沈余明,张国安. 山东大学学报(医学版). 2016(11)
硕士论文
[1]3D打印丝素蛋白-胶原支架与ADSCs构建组织工程脂肪的实验研究[D]. 信更新.兰州大学 2019
[2]成人腹股沟疝患者腹横筋膜中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达及分析[D]. 杨柳.青海大学 2018
本文编号：3049299
【文章来源】：生物学杂志. 2020,37(05)北大核心
【文章页数】：4 页
【部分图文】：
猪胶原标准品酶解多肽总离子流图
采用上述方法得到猪I、III型胶原的特征多肽分别为GETGPAGPAGPVGPVGAR、GPPGAVGPSGPR。图 2和图 3分别为猪I型胶原标准品特征多肽经质谱分析后获得的提取离子流图以及二级质谱图。2.2.2 猪胶原特征多肽浓度与信号强度关系
分别对猪I、III型胶原特征多肽的目标离子m/z 773.9和533.09进行选择离子监测,以样品浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作线性回归曲线。图4和图5分别为猪I型胶原特征多肽GETGPAGPAGPVGPVGAR的提取离子流图和线性回归曲线[y=171.04x+4.154(R2=0.9984)],二者线性关系良好。利用相同的方法得到猪III型胶原的线性回归曲线为y=41.54x+1.63(R2=0.9981)。按照1.2.2中的方法处理样品,进行定量分析。2.2.3 猪不同组织ECM中胶原类型及含量检测结果分析
【参考文献】：
期刊论文
[1]胶原蛋白的研究进展[J]. 邓浩,党政,尹青春,潘永波,徐彬,谭高好,王运选. 广州化工. 2019(18)
[2]猪小肠黏膜下层作为组织修复材料的研究进展[J]. 粟香,葛良鹏,李前勇. 中国比较医学杂志. 2019(08)
[3]胶原纤维的酶解液中羟脯氨酸含量测定方法的优化[J]. 张茜,卜德懿,田永鑫,鲜娇,张春晓,李艳红,彭必雨. 皮革科学与工程. 2019(03)
[4]非变性Ⅱ型胶原蛋白改善骨关节炎的研究进展[J]. 王海燕,孙君社,刘爱青,刘爽,邹国庆. 食品工业科技. 2019(15)
[5]Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、层黏连蛋白和透明质酸酶在诊断肝纤维化程度中的应用[J]. 李慧萍,郑雪琴,赵群,唐建江. 检验医学与临床. 2019(05)
[6]脱细胞猪小肠黏膜下层基质中纤维连接蛋白定量检测方法研究[J]. 陈毅,夏磊磊,张扬,高建萍,李赛娜,雷雄心,李勇超,张贵锋,赵博. 生物学杂志. 2018(02)
[7]美洲大蠊提取液对慢性难愈合创面Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白调控研究[J]. 李文华,伍伟明,刘筱,杨敏,周雯婷,曾娟妮. 湖南中医药大学学报. 2018(03)
[8]糖化改性对胶原蛋白乳化性能的影响[J]. 申璇,袁久刚,王强,王平,范雪荣,徐进. 生物学杂志. 2017(05)
[9]牛关节软骨Ⅱ型胶原的分离纯化与鉴定[J]. 李赛娜,康跻耀,邓平晔,高建萍,张贵锋,王明林. 过程工程学报. 2016(04)
[10]正常皮肤与增生性瘢痕中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的含量与比例[J]. 王成,荣艳华,沈余明,张国安. 山东大学学报(医学版). 2016(11)
硕士论文
[1]3D打印丝素蛋白-胶原支架与ADSCs构建组织工程脂肪的实验研究[D]. 信更新.兰州大学 2019
[2]成人腹股沟疝患者腹横筋膜中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达及分析[D]. 杨柳.青海大学 2018
本文编号：3049299
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